一种DNA连接酶活性测定方法

摘要

本发明公开了一种DNA连接酶活性测定方法，所述方法包括以下步骤：首先根据单链DNA模板合成毗连的两段引物，其中按引物的5’至3’方向来说，5’方向的引物的3’端与3’方向的引物的5’相邻，并且5’方向的引物为正常引物，而3’方向的引物为3’末端被磷酸化的引物；然后将这两段引物与单链DNA模板退火，以形成的单链DNA模板/正常引物-3’末端磷酸化引物复合物为底物，在DNA连接酶存在下进行连接反应；随后以连接反应的产物为底物，在具有链置换活性的聚合酶作用下进行聚合反应，然后检测双链DNA或单链DNA的相对量，并以该相对量为基础推导出DNA连接酶的活性程度。本发明方法无放射性污染；操作简单快速；并且可以对DNA连接酶活性进行定量的检测分析。

主权项

一种DNA连接酶活性测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：首先根据单链DNA模板合成毗连的两段引物，其中按引物的5’至3’方向来说，5’方向的引物的3’端与3’方向的引物的5’相邻，并且5’方向的引物为正常引物，而3’方向的引物为3’末端被磷酸化的引物；然后将这两段引物与单链DNA模板退火，形成单链DNA模板/正常引物‑3’末端磷酸化引物复合物；接着以该单链DNA模板/正常引物‑3’末端磷酸化引物复合物为底物，在DNA连接酶存在下进行连接反应；随后以连接反应的产物为底物，在具有链置换活性的聚合酶作用下进行聚合反应，聚合反应完成后检测双链DNA或单链DNA的相对量，并以该相对量为基础推导出DNA连接酶的活性程度。