一种大菱鲆胚胎发育期原始生殖细胞（PGCs）的定位标记方法

摘要

本发明涉及PGCs的定位标记方法，具体的说是一种大菱鲆胚胎发育期原始生殖细胞（PGCs）的定位标记方法。采集大菱鲆各个阶段胚胎样品固定，固定后用50%甲酰胺于-20-40℃保存，待用；将上述保存各个阶段胚胎样品去卵膜之后用不同浓度的1×PBST—甲醇洗脱液依次进行梯度脱水处理后于-20℃至-40℃保存；将上述脱水处理后各个阶段胚胎样品采用梯度甲醇复水，再用1×PBST缓冲液洗涤，洗脱后于60-65℃预杂交1-2h；预杂交后在含有大菱鲆RNA探针的杂交液中于60-65℃下杂交过夜；杂交后洗涤，抗体孵育显色，进而定位标记。本发明提供了一种更加便利实用的样品保存方法，解决了传统胚胎整体原位杂交经甲醇脱水保存后导致去卵膜卵黄困难的问题，同时省去蛋白酶K消化步骤，简化了操作步骤。

主权项

一种大菱鲆胚胎发育期原始生殖细胞（PGCs）的定位标记方法，其特征在于：1）采集大菱鲆各个阶段胚胎样品固定，固定后用50%甲酰胺于‑20‑40℃保存，待用；2）将上述保存各个阶段胚胎样品去卵膜之后用不同浓度的1×PBST—甲醇洗脱液依次进行梯度脱水处理后于‑20℃至‑40℃保存；3）将上述脱水处理后各个阶段胚胎样品采用梯度甲醇复水，再用1×PBST缓冲液洗涤，洗脱后于60‑65℃预杂交1‑2h；4）预杂交后在含有大菱鲆RNA探针的杂交液中于60‑65℃下杂交过夜；杂交后洗涤，抗体孵育显色，进而定位标记。