一种优秀冰雪运动员骨骼肌卫星细胞体外分离培养方法

摘要

本发明涉及优秀冰雪运动员骨骼肌卫星细胞体外分离培养技术，属于细胞生物学、运动创伤学、组织工程学交叉学科领域。通过采用0.9％无菌生理盐水清洗肌肉组织，37°条件下1％I型胶原酶及0.1％链酶蛋白酶联合消化分离骨骼肌卫星细胞，含10％胎牛血清高糖DMEM培养基培养以及采用冻存液DMEM基础培养基+二甲基亚砜+胎牛血清(比例为5∶1∶4)冻存骨骼肌卫星细胞，提供了一种简易、高效、传代稳定的优秀冰雪运动员骨骼肌卫星细胞体外分离培养方法。

主权项

一种优秀冰雪运动员骨骼肌卫星细胞体外分离方法，其特征在于步骤如下：（1）       取成人三角肌活检组织3mm³ ;（2）       用0.9%无菌生理盐水清洗两遍；（3）       用1%I型胶原酶消化30min;（4）       用0.1%链酶蛋白酶消化30min,用滴定管吹打使卫星细胞与基膜分离；（5）       用含10%胎牛血清高糖DMEM培养基终止消化，用400目细胞筛过滤，500g离心5min;（6）       弃上清，高糖DMEM培养基重悬接种贴壁培养；（7）       待骨骼肌卫星细胞贴壁汇合率至95%时用0.25%胰蛋白酶消化传代培养；（8）骨骼肌卫星细胞冻存采用冻存液DMEM基础培养基+二甲基亚砜+胎牛血清，冻存比例为5:1:4。