牛乳腺特异性表达载体pBC-αs1及制备方法

摘要

本发明公开了一种牛乳腺特异性表达载体pBC-αs1及制备方法。本发明构建了一个可使目的基因在牛乳腺中特异性表达的载体pBC-αs1，通过在pcDNA3.1中插入pBC1中的绝缘子基因片段来防止其他基因或调控信号对目的基因的影响及异染色质的形成；通过在pcDNA3.1中插入牛α酪蛋白的调控基因片段来使目的基因在牛乳腺中特异性表达；通过构建两个酶切位点来控制目的基因的方向性，本发明实现了表达的高效性，并且通过Cre-LoxP重组酶系统可以在细胞水平上用Cre重组酶表达质粒转染中靶细胞删除抗性标记基因，通过绝缘子防止其它基因或调控信号对目的基因的影响及异染色质的形成。

主权项

一种牛乳腺特异性表达载体pBC‑αs1，其特征在于：在质粒pcDNA3.1结构的MunI与BamHI两酶切位点之间插入有质粒pBC1的MunI与BamHI的酶切片段，称此时的载体为pcDNA3.1‑In载体；在载体pcDNA3.1‑In的BamHI与PmeI两酶切位点之间插入有合成好的牛α酪蛋白的5'端部分调控序列as1‑5及牛α酪蛋白的3'端部分调控序列as1‑3；载体pcDNA3.1‑In的BamHI酶切端连接牛α酪蛋白的5'端部分调控序列as1‑5；载体pcDNA3.1‑In的PmeI酶切端连接牛α酪蛋白的3'端部分调控序列as1‑3，其中as1‑5另一末端携带NotI酶切位点，as1‑3另一末端携带XhoI酶切位点，NotI和XhoI酶切位点作为目的基因插入位点。