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一种固相片段法制备猪O型口蹄疫合成肽抗原2600的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1、将2‑氯‑3‑苯甲基氯树脂、三苯甲基醇树脂或4‑羟甲基‑3‑甲氧基丁酸树脂置于二氯甲烷、N,N‑二甲基甲酰胺或N‑甲基‑2‑吡咯烷酮中10～120min，充分溶胀，所得溶胀树脂溶液中树脂的浓度为0.05～0.2g/ml；步骤2、向步骤1所得溶胀树脂溶液中加入9‑芴甲氧羰基保护的氨基酸与二异丙基乙基胺或9‑芴甲氧羰基保护的氨基酸与缩合剂，于10～45℃反应15～60min；抽干，加入封闭试剂反应15～30min以封闭未反应的基团，以N,N‑二甲基甲酰胺或N‑甲基‑2‑吡咯烷酮洗涤树脂数次，加入脱除试剂脱除9‑芴甲氧羰基保护的氨基酸上的9‑芴甲氧羰基保护基，洗涤后加入接肽试剂进行接肽反应，得到肽树脂链，即氨基端经9‑芴甲氧羰基修饰、羧基端连接树脂如下序列：SEQ ID No:3、SEQ ID No:4、SEQ ID No:5、SEQ ID No:6；步骤3、将步骤2所得肽树脂链加入到稀酸或弱酸溶液中，于10～45℃反应60～90min，加入2,4,6‑三甲基吡啶或二异丙基乙基胺中和，过滤；滤液浓缩，加入醇类、醚类或烷类溶剂析出固体保护肽，过滤收集滤饼真空干燥得到肽段，即氨基端经9‑芴甲氧羰基修饰的如下序列：SEQ ID No:3、SEQ ID No:4、SEQ ID No:5、SEQ ID No:6；步骤4、将4‑(4’‑二甲氧基‑9‑芴甲氧胺甲基)‑苯氧甲基树脂置于二氯甲烷、N,N‑二甲基甲酰胺或N‑甲基‑2‑吡咯烷酮中30～60min，充分溶胀，溶胀树脂溶液中树脂的浓度为0.05～0.2g/ml；步骤5、向步骤4所得溶胀树脂溶液中加入脱除试剂，于10～45℃反应15～30min，用二氯甲烷、N,N‑二甲基甲酰胺或N‑甲基‑2‑吡咯烷酮洗涤数次，加入接肽试剂，连接第一个氨基酸到树脂上，于10～45℃反应0.5～3.0h，抽干，用二氯甲烷、N,N‑二甲基甲酰胺、N‑甲基‑2‑吡咯烷酮洗涤树脂数次，再加入脱除试剂进行脱除反应脱除9‑芴甲氧羰基，用二氯甲烷、N,N‑二甲基甲酰胺或N‑甲基‑2‑吡咯烷酮洗涤后加入9‑芴甲氧羰基保护的氨基酸、缩合剂、二异丙基乙基胺的接肽试剂全溶物进行接肽反应，得到肽树脂，即氨基端经9‑芴甲氧羰基修饰、羧基端连接树脂的SEQ ID No:2；步骤6、将步骤5所得肽树脂用溶胀剂溶胀后，加入脱除试剂脱除9‑芴甲氧羰基，于10～45℃反应15～30min，用二氯甲烷、N,N‑二甲基甲酰胺、N‑甲基‑2‑吡咯烷酮洗涤数次，依次加入氨基端经9‑芴甲氧羰基修饰的SEQ ID No:3、缩合剂、二异丙基乙基胺的N‑甲基‑2‑吡咯烷酮全溶物；氨基端经9‑芴甲氧羰基修饰的SEQ ID No:4、缩合剂、二异丙基乙基胺的N‑甲基‑2‑吡咯烷酮全溶物；氨基端经9‑芴甲氧羰基修饰的SEQ ID No:5、缩合剂、二异丙基乙基胺的N‑甲基‑2‑吡咯烷酮全溶物；氨基端经9‑芴甲氧羰基修饰的SEQ ID No:6、缩合剂、二异丙基乙基胺的N‑甲基‑2‑吡咯烷酮全溶物；于10～45℃反应0.5～3.0h，抽干；每加入一个肽链都要用N,N‑二甲基甲酰胺或N‑甲基‑2‑吡咯烷酮洗涤肽树脂数次；加入脱除试剂脱除保护基，得到全保护肽树脂，即羧基末端连接树脂的依次包括SEQ ID No:6、SEQ ID No:5、SEQ ID No:4、SEQ ID No:3和SEQ ID No:2的序列；步骤7、向步骤6所得全保护肽树脂中加入T辅助细胞表位、缩合剂的全溶物，于10～45℃反应0.5～6.0h，抽干，依次用二氯甲烷、N‑甲基‑2‑吡咯烷酮、甲醇洗涤树脂数次得到全保护的抗原肽2600树脂，即氨基端经T辅助细胞表位修饰、羧基末端连接树脂的依次包括SEQ ID No:6、SEQ ID No:5、SEQ ID No:4、SEQ ID No:3和SEQ ID No:2的序列；步骤8、将预冷至‑10～10℃的切断液加入到步骤7所得的抗原肽2600树脂中切除所有保护基团及树脂，于10～45℃反应1～4h，过滤；浓缩滤液后加入甲基叔丁基醚析出沉淀，用甲基叔丁基醚洗涤沉淀数次后干燥得到未环化的抗原肽2600粗品，即氨基端经T辅助细胞表位修饰的SEQ ID No:1；步骤9、将步骤8所得抗原肽2600粗品溶于二甲亚砜水溶液，调节pH值至6.0～8.0的条件下进行完全环化，即得环化合成肽抗原2600。 |
