一种通过促进活性蛋白聚集体解聚提高淀粉脱支酶产量的方法

摘要

本发明公开了一种通过促进活性蛋白聚集体解聚提高淀粉脱支酶产量的方法，属于发酵工程技术领域。本发明以重组大肠杆菌pulB/pET20b(+)/BL21(DE3)为生产菌株，在工业级发酵培养基中连续流加甘油进行分批补料发酵，发酵后期通过添加Tween 80来促进活性蛋白聚集体解聚提高酶的分泌，发酵35小时，胞外酶活可达386U/mL。采取本策略进行发酵实现了酶的高效胞外表达，大幅提高了生产强度。由于酶分泌到培养基中，菌体经过简单的过滤就可得到酶液，工艺简单易行，减少了后续提取成本，适合工业化生产。

主权项

一种通过促进活性蛋白聚集体解聚提高淀粉脱支酶产量的方法，其特征在于以含有重组淀粉脱支酶编码基因的大肠杆菌为生产菌株，发酵工艺如下： 将活化后的种子培养液接入发酵培养基中，通过控制搅拌转速和通风量使溶氧维持20‑30％，控制温度为25‑37℃，流加氨水控制pH7.0±0.5，培养5‑6小时； 待溶氧上升至80‑100％，以指数流加的方式补加补料液使溶氧维持在20‑30％，温度维持在25‑37℃，流加氨水控制pH7.0±0.5，当菌体OD600达到15‑30时补加0.75‑1.5％(m/V)的甘氨酸； 继续培养至菌体吸光度OD600达到45‑60时，降温至23‑30℃，通过补加乳糖溶液，使发酵液剩余乳糖浓度控制在4‑6g/L；同时溶氧控制在20‑30％，控制pH7.0±0.5，诱导15小时，添加0.5％吐温80后再继续发酵5小时，所述吐温80的添加量为5g/L；所述淀粉脱支酶编码基因编码序列如Genbank号JN872757.1所示。