鹿茸毛细管电泳DNA指纹图谱及鉴定方法

摘要

本发明涉及中药鉴定技术领域，具体为一种鹿茸毛细管电泳DNA指纹图谱及鉴定方法。鹿茸毛细管电泳DNA指纹图谱包括DNA提取、PCR扩增、PCR产物鉴定，最终构建鹿茸DNA指纹图谱；鹿茸DNA指纹鉴定方法包括鹿茸DNA标准指纹图谱的建立、样品DNA指纹图谱的建立、利用相似度软件进行结果鉴定。该指纹图谱及鉴定方法可用于鹿茸样品的鉴定。本发明能从遗传本质上对鹿茸进行真伪鉴定，鉴定方法具有简便、快速、结果可靠等优点。

主权项

一种鹿茸毛细管电泳DNA指纹图谱的建立方法，其特征是，它包含下述步骤：1)DNA提取：取鹿茸片，按盐析法提取其线粒体DNA；2)PCR扩增：对10‑mer引物进行筛选，应用300对引物，对上述DNA进行扩增；3)PCR产物鉴定：扩增产物进行毛细管电泳分析，记录电泳图谱，电泳条件如下：色谱柱：50cm×75μm，有效长度40cm的未涂层石英毛细管柱；电泳缓冲液：20mM磷酸盐缓冲液‑15mM四丁基磷酸铵‑2mM乙二胺四乙酸‑1％(w/v)羟丙基甲基纤维素，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.3；分离电压：‑8kV；温度：25℃；检测波长：260nm；进样条件：电动进样，‑10kV，15S；4)鹿茸DNA指纹图谱的建立：根据电泳图谱中各引物的扩增情况，选择有代表性的多态性RAPD电泳图谱构建鹿茸DNA指纹图谱。