吐温80结合超声波获得丛粒藻单细胞的方法

摘要

本发明公开了一种使用吐温80结合超声波获得丛粒藻单细胞的方法，包括收集处于稳定期的藻细胞，用吐温80孵育藻细胞；利用超声波的机械力对孵育完的藻细胞进行破碎；分离得到单个游离的细胞以及单细胞活性的检测等步骤。所述方法成功获得丛粒藻单细胞，培养过程中营养物质和光照均一化吸收，制备时间周期短，丛粒藻单细胞获得率高。

主权项

一种使用表面活性剂结合超声波获得丛粒藻单细胞的方法，包括以下具体步骤：(1)收集处于稳定期的藻细胞，用吐温80孵育藻细胞用500目筛绢收集100ml的藻液溶于10ml体积分数为5％的吐温80中，由于丛粒藻藻细胞有自然沉降的现象，把装有藻细胞的离心管放在振荡摇床上，转速为150rpm/min，孵育30min，使藻细胞间的烃类和脂类物质完全乳化；(2)利用超声波的机械力对孵育完的藻细胞进行破碎；在吐温80中孵育30min后，把藻细胞按以下条件进行超声破碎：功率为200w，超声时间为5s，间隙时间为5s，总处理时间为1min；超声处理完以后的藻细胞，用真空抽滤泵和8μm的滤膜进行分离吐温和藻细胞；抽滤完以后把留在滤膜上的藻细胞重悬在10mlBG‑11培养基中，把滤膜上的藻细胞用1ml的移液器全部冲洗下来；对于重悬的藻细胞再进行一次功率200w、超声10s的超声破碎，再一次用8μm滤膜经过抽滤的方法收集藻细胞，此时会发现仍然会有吐温80的存在，为了避免残留的吐温80对藻细胞的后期生长造成破坏，再次用无菌的BG‑11培养基重悬冲洗，最后将处理完的藻细胞重悬在10ml的BG‑11培养基中，进行显微观察，发现出现了单细胞，但是单细胞是和未完全裂解的藻集落混合在一起的；(3)分离得到单个游离的细胞用500目的筛绢过滤得到的单细胞和藻集落的混合藻液，把较大的藻集落留在500目筛绢上，大多单细胞的藻和两细胞的藻被过滤到液体中，把过滤的培养液通过8μm滤膜收集起来，重悬在无菌的BG‑11培养基中；(4)单细胞活性的检测由于考虑到在实验过程中，吐温80和超声破碎对藻细胞的损伤作用，所以对于得到的单细胞进行了活性的检测，在连续的培样和观察过程中，发现大于90％的藻细胞的存活状态较好：细胞性状稳定，没有细胞膜的破裂和色素的溶出，部分获得的单细胞在培养3‑4天以后还可以进行进一步的分裂。