Método para aislar anticuerpos intracelulares capaces de neutralizar interacciones proteicas

摘要

Un método para aislar anticuerpos intracelulares capaces de neutralizar una interacción entre un ligando proteico x conocido y un ligando proteico y conocido en el interior de una célula, que comprende las etapas de: a) obtener una cepa de levadura recombinante en la que: i) una secuencia que codifica el ligando proteico x y una secuencia que codifica el ligando proteico y se clonan en un primer vector de expresión de levadura, pero ii) al menos uno de x o de y se expresa de manera inducible, y iii) la interacción entre el ligando proteico x y el ligando proteico y conduciría a la producción de un represor de una función esencial de la célula de levadura o de un agente tóxico, de modo que se obtendrían células de levadura no viables; b) transformar la cepa de levadura recombinante del punto a) con una biblioteca de expresión de anticuerpos intracelulares por medio de un segundo vector de expresión de levadura; c) seleccionar una cepa de levadura recombinante transformada del punto b) induciendo la expresión tanto del ligando x como del ligando y; y aislando clones de levadura receptores capaces de crecer; d) aislar anticuerpos intracelulares capaces de neutralizar la interacción entre el ligando proteico x y el ligando proteico y de los clones de levadura recombinantes receptores capaces de crecer, en donde la biblioteca de expresión de los anticuerpos intracelulares se obtiene de linfocitos de ratones no inmunizados y se expresa directamente en las células de levadura sin utilizar el cribado de presentación de fagos.