一种非病毒基因载体的制备方法

摘要

本发明提供一种非病毒基因载体的制备方法，该方法是利用原生细胞模型protocell的技术与方法，用中性脂质囊泡包裹PCR组分液(pDNA模板、聚合酶、引物、dNTPs)，然后进行PCR扩增，得到内部包裹大量DNA片段的protocell液。本发明的在脂质囊泡中扩增DNA片段，使载体中包载的基因拷贝数大大增加，基因转染效率也显著提高；制备脂质载体采用中性磷脂，无正电荷成分，使其毒性明显降低。本发明方法设计合理，制备工艺简单，具有广阔的应用前景。

主权项

一种非病毒基因载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用薄膜分散法或逆向蒸发法制备脂质囊泡，将PCR组分液包裹在囊泡内；(2)对脂质囊泡包裹的DNA片段进行PCR扩增：用0.02U/μL的DNase I消化除去外水相的pDNA模板，对所得包裹PCR组分液的脂质囊泡进行20个PCR循环，得到protocell模型；在protocell液中加入0.02U/μL的DNase I酶，室温消化5分钟，去除囊泡未包封的DNA片段。