一种白桦叶片基因组DNA提取方法

摘要

本发明公开了一种白桦叶片基因组DNA提取方法，改良了CTAB与STE溶液；采用常温下等体积的改良CTAB溶液和STE溶液洗涤充分研磨的材料2次；水浴裂解温度由65℃提高至70℃；在沉淀DNA时，采用无水乙醇:异丙醇(体积比为2:1)混合沉淀剂，低速离心，以降低杂质的沉淀。这种方法能分离出高质量的白桦叶片基因组DNA。

主权项

一种白桦叶片基因组DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：①叶片在加液氮的研钵中研磨至细末后，加入300 μL改良STE溶液，300 μL改良CTAB溶液和20 μL β‑巯基乙醇，混合后震荡3min；改良CTAB溶液配方：2.5%(W/V) CTAB，150 mmol/L Tris‑Cl pH8.0，20 mmol/L EDTA pH8.0，1.4 mmol/L NaCl；改良SET溶液配方：150 mmol/L Tris‑Cl pH8. 0，20mmol/L EDTA pH8. 0，1.4 mmol/L NaCl；②常温5000g离心5min，弃上清；向沉淀中加入600 μL改良CTAB溶液和20μL β‑巯基乙醇70℃水浴15min后16060g离心5min；③取上清加入等体积氯仿充分混匀，16060g离心5min，重复此步骤l~2次；④取上清加入等体积的无水乙醇:异丙醇混合液，无水乙醇:异丙醇的体积比为2:1，上下颠倒混合均匀后常温下静置3min，6080g离心3min；⑤倒掉上清液，用70%预冷的乙醇洗涤2~3次，干燥后溶于50 μL TE或去离子水中；⑥电泳检测DNA的完整性，A260/280测定DNA浓度和纯度。