一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法

摘要

本发明研究了一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养等步骤，本发明方法所制备的乌饭树悬浮细胞生长分裂速度快，操作工艺简单可控，有助于获得大量的药用次生代谢产物，且生长周期短。

主权项

一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养，其主要步骤如下：（1）采取乌饭树幼嫩的叶片，在超净工作台上对其进行消毒处理；（2）取步骤（1）消毒处理过的叶片接种入改良MS+2,4‑D3‑5mg/L+6‑BA0.4mg/L+活性炭1g/L+3%蔗糖+0.65%琼脂培养基中进行愈伤组织诱导，光照强度800lx，光期6h，暗期18h；（3）取步骤（2）中诱导出来的乌饭树愈伤组织接入改良MS+CH200mg/L+IAA0.3mg/L+ IBA0.2mg/L+6‑BA1‑2mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂进行愈伤组织的增殖，pH5.8，光照2000lx，温度28℃；（4）取步骤（3）增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基改良MS+硫代硫酸钠8mg/L+IAA3mg/L+2ip0.05‑0.1mg/L+5mL/L蜂蜜，45继代三次后称重计算增殖率。