miRNA分析方法

摘要

本发明提供了用于miRNA表达分析的无PCR、多路连接检验，该检验在单一反应中产生高度定量、10-100路的miRNA谱。本发明的方法使用2步连接检验来产生miRNA特异性连接产物的阵列，该阵列能够通过大小鉴别方法例如凝胶电泳或单分子分离来解码和定量。一种实施方式是低成本检验，其能够使用在几乎所有的分子生物学实验室中可用的标准工具来进行。该检验仅要求凝胶设备和阅读器(reader)用于检测。其它实施方式包括磁珠和其它大小排除设备大小排阻设备的使用，其给出日益更高的灵敏度、较低的样品消耗、以及减少的处理步骤。

主权项

一种用于检测样品中一种或更多种感兴趣的目标RNA的方法，包含：a)获得含有一种或更多种感兴趣的目标RNA的样品；b)向a)的所述样品加入足够量的衔接子探针和足够量的第一连接酶；c)通过孵育以及允许所述衔接子探针连接到所述样品中所述一种或更多种感兴趣的目标RNA的3'‑OH端，进行第一连接步骤；d)向b)的所述样品加入足够量的共同探针和鉴别探针、以及足够量的第二连接酶；e)通过孵育c)的所述样品足够量的时间来引起d)的探针与b)的连接的感兴趣的目标RNA和衔接子探针的杂交，并允许所述鉴别探针和共同探针之间的连接，进行第二连接步骤；以及f)通过一种或更多种大小鉴别方法分析所述产物。