多壁碳-聚苯胺-壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备

摘要

本发明涉及一种多壁碳-聚苯胺-壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备，属于生物传感器制备领域。本发明第一步为多壁碳-聚苯胺-壳聚糖纳米复合材料及纳米金胶的制备：以多壁碳、苯胺、壳聚糖为原料，利用多壁碳-聚苯胺-壳聚糖复合材料的良好电化学氧化还原活性、好的生物相溶性以及高度的化学稳定性，修饰工作电极以促进电子转移；第二步为纳米金胶和多壁碳-聚苯胺-壳聚糖纳米复合液共同修饰电极的免疫传感器制备。具大量氨基的纳米复合液与纳米金胶形成的金氨体系有较高的稳定性和高度有序性，保持了抗体的生物活性且提高了抗体有效固定量。本发明的免疫传感器，检测时间较短，灵敏度高，选择性、稳定性好，再生能力好，回收率符合要求。

主权项

多壁碳‑聚苯胺‑壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备方法，其特征在于：一种新型的多壁碳‑聚苯胺‑壳聚糖纳米复合材料和纳米金胶的制备和多壁碳‑聚苯胺‑壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备，制备步骤为：1）多壁碳‑聚苯胺‑壳聚糖纳米复合液的制备：采用原位聚合的方法制备聚苯胺包裹的多壁碳纳米复合材料，苯胺单体在使用之前在低压真空下提纯，120mg多壁碳以及1g苯胺单体同时加入到20mL 1M 的盐酸溶液中，超声2h形成均匀分散的溶液，然后将溶液置于冰浴搅拌，待溶液冷却后加入溶有过硫酸铵的盐酸溶液，其中过硫酸铵的物质的量与苯胺单体物质的量比例为1：1，为了能让苯胺单体完全聚合，溶液在0‑5°C冰浴中持续恒力搅拌反应12h，聚合后的溶液抽滤收集产物，并依次用去离子水、甲醇和丙酮洗涤，最后真空干燥12h，将壳聚糖溶于1.0%的醋酸溶液中，配制成0.5% 壳聚糖溶液，室温下磁力搅拌至壳聚糖完全溶解，称取10mg多壁碳‑聚苯胺加入到10mL 0.5% 壳聚糖溶液中，超声分散8h得到分散均匀的多壁碳‑聚苯胺‑壳聚糖纳米复合液；2) 纳米金胶的制备：采用柠檬酸三钠热还原氯金酸的方法，所有的玻璃器皿均用王水浸泡过夜，再用12mol/L的氢氧化钠水溶液浸泡2h，洗涤干净备用，将98mL去离子水和2mL 50mM氯金酸溶液混合，快速搅拌下加热至亚沸状态，即产生回流时，迅速加入10mL 38.8mM的柠檬酸三钠溶液，混合物加热至沸腾后，继续搅拌20min，这个过程中溶液由淡黄色转为无色，然后变灰黑色，最后成酒红色，除去热源后继续搅拌至室温下慢慢冷却，将冷却后的金胶溶液置于干净的棕色玻璃瓶中于4°C冰箱中避光保存备用，数月有效；3) 多壁碳‑聚苯胺‑壳聚糖/纳米金胶复合修饰免疫传感器的制备步骤：在预处理好的玻碳电极表面滴涂7μL制备好的多壁碳‑聚苯胺‑壳聚糖纳米复合液，常温下静置2h，用pH=7.5 的PBS缓冲液冲洗电极表面；电极表面晾干后，取7μL纳米金胶滴涂在电极表面，常温下静置1.5h，然后用pH=7.5 的PBS缓冲液冲洗表面，氮气吹干；之后将电极沉浸在毒死蜱单克隆抗体溶液中，4°C条件下浸泡8‑12h，取出后用PBS冲洗表面，晾干待用；最后将上述制备好的电极浸于0.5%BSA溶液中，室温下静置2h，以封闭非特异性结合位点，取出置于室温下晾干，免疫传感器制作完成，保存在4°C条件下备用。