一种重阳木愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法

摘要

本发明研究了一种重阳木愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养、细胞的调控等步骤。本发明方法可以快速获得大量的重阳木悬浮细胞，操作简单，细胞增殖率高，生长周期短，可以无限度的提供重阳木悬浮细胞制药原料，有利于资源的开发和利用。

主权项

一种重阳木愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养、细胞的调控等，主要步骤如下：（1）取重阳木的幼嫩叶片，按照常规的消毒方法对其进行消毒处理；（2）将步骤（1）灭菌处理过的重阳木叶片接入培养基配方为改良MS+KT0.5mg/L+2，4‑D2.0mg/L+PA500mg/L诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5‑6，光照2000lx，温度25℃；（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织放入改良MS+KT0.1‑0.2mg/L+2，4‑D0.2‑0.5mg/L培养基进行愈伤组织增殖，附加蔗糖20g/L，PH5.8，光照2500lx，温度25℃；（4）取步骤（3）增殖后松散的愈伤组织接入改良MS+NAA1.0 mg/L+KT0.5mg/L+5‑8mg/L硝酸银，每200ml锥形瓶接种60ml液体，采用水平震荡培养，转速90r/min，振幅3cm。