一种测定降钙素原的试剂及该试剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种测定降钙素原的试剂及其制备方法。目的是提供的提供的试剂具有准确度高的特点；提供的试剂制备方法具有制作方便的特点。技术方案是：一种测定降钙素原的试剂，包括以下成份：a、降钙素原试剂1；b、降钙素原试剂2；c、液体型降钙素原参考校准品；一种测定降钙素原试剂的制备方法，按如下步骤进行：1）降钙素原试剂1：混合均匀；2）降钙素原试剂2：（1）取悬浮液；（2）混合物反应；（3）得羧基胶乳微球悬浮液；（4）调整浓度；（5）取（3）中的悬浮液加入（4）中；（6）反应；（7）加入乙醇胺；（8）离心处理；3）液体型降钙素原参考校准品：按配方量混合，按降钙素原含量排列或在混合液中加入降钙素原纯品。

主权项

一种测定降钙素原的试剂，包括以下成份及含量：1)降钙素原试剂1用纯化水800ml将上述原料溶解后，再补加纯化水定容至1000ml，然后用盐酸调pH至7.2；2)降钙素原试剂2(1)取80nm的羧基胶乳微球用50mmol/L、pH6.0的MES缓冲液稀释成0.01mg/ml的悬浮液；(2)按1ml羧基胶乳微球悬浮液加20mg 1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和40mg N‑羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐的比例，将试剂立即混匀后在室温将此混合物反应15‑30分钟，不断搅拌；(3)用50mmol/L、pH6.0的MES缓冲液或纯化水洗涤羧基胶乳微球，除去未反应的Sulfo‑NHS和EDAC，并将胶乳微球在纯化水中悬浮得羧基胶乳微球悬浮液，其中羧基胶乳微球的含量为0.01mg/ml；(4)将羊抗人降钙素原抗体溶于50mmol/L、pH8.5的硼酸盐缓冲溶液中，使羊抗人降钙素原抗体的蛋白质浓度为0.25mg/ml；(5)取步骤(3)中的羧基胶乳微球悬浮液1ml立即加入步骤(4)中的羊抗人降钙素原抗体1ml；此时该混合液中羧基胶乳微球、羊抗人降钙素原抗体和缓冲溶液的浓度分别为0.005mg/ml、0.125mg/ml、25mmol/L；(6)将混合物在37℃反应3小时，不断搅拌；(7)按1ml反应混合物加2.5μl乙醇胺的比例加入乙醇胺，反应15分钟，不断搅拌；(8)用15000转/分离心除去未结合的蛋白质和乙醇胺，用50mmol/L、pH7.2的MOPSO缓冲液稀释，使羊抗人PCT抗体胶乳颗粒的浓度为0.01ml/ml,然后加入牛血清白蛋白3mmol/L、3mmol/L叠氮钠溶解混匀后即得降钙素原试剂2；3)液体型PCT参考校准品按照需要的PCT参考校准品浓度将相应的PCT纯品1000ng/ml加入上述混合液中，制备得形成系列浓度的5个参考校准品；5个参考校准品中PCT含量由低到高分别为5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml。