一种对6磷酸葡萄糖脱氢酶基因进行测序的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及基因工程领域，提供了一种对6磷酸葡萄糖脱氢酶基因进行测序的方法及试剂盒，该方法包括以下步骤：A.利用G6PD基因特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，并基于扩增产物构建测序文库；B.对测序文库进行单分子扩增，得到与所述多个目标区域对应的多个单分子扩增产物；C.同时对所述多个单分子扩增产物进行高通量基因测序，得到所述多个目标区域的序列信息。该方法及其相应的试剂盒利用高通量测序技术对多个目标区域同时进行区域测序，提高了检测效率，同时还能提高检测的准确性和灵敏度，并能进一步同时对大量样品进行多区域检测。

主权项

一种用于非疾病诊断目的的对6磷酸葡萄糖脱氢酶基因进行测序的方法，其特征在于，包括以下步骤： A.利用G6PD基因特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，并基于扩增产物构建测序文库； B.对测序文库进行单分子扩增，得到与所述多个目标区域对应的多个单分子扩增产物； C.同时对所述多个单分子扩增产物进行高通量基因测序，得到所述多个目标区域的序列信息； 所述步骤A包括以下步骤： A1.利用G6PD基因特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，得到与所述多个目标区域对应的扩增产物； A2.利用接头元件，与所述多个目标区域对应的扩增产物进行连接，得到测序文库；所述接头元件采用平末端接头、突出末端接头、带茎环结构的接头和分叉接头中的至少一种，且至少采用分叉接头这一种接头；所述分叉接头是双链核酸分子，包括互补区和分叉区，所述分叉区的两条单链各包含至少一个扩增引物结合位点，所述互补区包括至少一个Ⅱs型限制性内切酶酶切识别位点； 所述待测样品为全血、血清、血浆或组织样品； 所述步骤A2包括以下步骤： A21.对与所述多个目标区域对应的扩增产物进行片段化，得到片段化产物； A22.利用接头元件，与所述片段化产物进行连接，构建测序文库； 所述步骤A22包括以下步骤： A221.利用第一接头与片段化产物的两端连接，得第一连接产物； A222.环化第一连接产物，得环化产物； A223.Ⅱs型限制性内切酶酶切环化产物，得酶切产物； A224.在酶切产物两端接上第二接头和第三接头，得测序文库； 所述第一接头为所述分叉接头，且包含有2个酶切识别位点，其中一个为限制性内切酶识别位点，用于使步骤A222形成的第一连接产物的两端在相应的酶的作用下，形成粘性末端，且它们之间互补，能够进行自身环化；另一个为IIs型限制性内切酶酶切识别位点，用于在步骤A223中，利用识别该酶切位点的酶识别环化产物，进行酶切，进而得到酶切产物。