一种续随子悬浮细胞的快速繁殖方法

摘要

本发明研究了一种续随子悬浮细胞的快速繁殖方法，包括续随子无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养、悬浮细胞的诱变等步骤，本发明方法所制备的续随子细胞活性高，生长周期短，细胞形状均一稳定，为药用植物细胞工业化生产奠定基础。

主权项

一种续随子悬浮细胞的快速繁殖方法，包括续随子无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养、悬浮细胞的诱变等，其主要步骤如下：（1）取续随子幼嫩的叶片，进行消毒处理；（2）取步骤（1）消毒处理过的续随子幼嫩的叶片接入Miller+ZT0.5mg/L+KT1.5mg/L+0.4mg/ml青霉素培养基中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH6.0，光照强度1000lx，光照时间6h/d，温度22℃；（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织放入液体培养基Miller+0.3mg/LIAA+1.0‑1.5mg/L2ip+100mg/L水解乳蛋白进行液体悬浮细胞培养，附加蔗糖30g/L，pH5.8，光照2500lx，光照时间15h/d，温度24℃；（4）取步骤（3）培养一个月后的悬浮细胞放入过滤灭菌后的甲基磺酸乙酯溶液中，浓度为0.3%‑1%，处理时间为1‑5h，处理后加入新鲜的培养基中培养。