植物体外泛素蛋白降解系统及其应用

摘要

本发明公开了一种植物体外泛素蛋白降解系统及其应用。本发明所提供的植物体外泛素蛋白降解系统为由来自于拟南芥的1种泛素激活酶、14种泛素结合酶、野生型及K48R和K63R点突变的泛素蛋白组成的组合物。与目前常用的体外泛素化反应成分相比，本发明组合物的全部组分均来源于模式植物拟南芥，当用于检测植物来源的待测蛋白是否具有泛素化活性时，分析结果更真实可信；另外本发明组合物中包含了能代表拟南芥泛素结合酶绝大部分亚家族特征的组分，覆盖面广，利用这些组分能更全面的检测泛素连接酶的活性并分析E2-E3的特异性结合情况，可为基因功能的研究提供更多的线索；再则，利用点突变泛素蛋白还可分析泛素化反应所形成的多聚泛素链的类型。

主权项

用于体外检测待测植物蛋白泛素化修饰活性的组合物，由如下(1)‑(3)组成：(1)泛素激活酶UBA2和野生型单体泛素蛋白；所述泛素激活酶UBA2的氨基酸序列如序列表中序列1所示；所述野生型单体泛素蛋白的氨基酸序列如序列表中序列3所示；(2)14种泛素结合酶：氨基酸序列如序列表中序列5所示的泛素结合酶UBC27；氨基酸序列如序列表中序列7所示的泛素结合酶UBC1；氨基酸序列如序列表中序列9所示的泛素结合酶UBC2；氨基酸序列如序列表中序列11所示的泛素结合酶UBC3；氨基酸序列如序列表中序列13所示的泛素结合酶UBC10；氨基酸序列如序列表中序列15所示的泛素结合酶UBC32；氨基酸序列如序列表中序列17所示的泛素结合酶UBC13；氨基酸序列如序列表中序列19所示的泛素结合酶UBC4；氨基酸序列如序列表中序列21所示的泛素结合酶UBC5；氨基酸序列如序列表中序列23所示的泛素结合酶UBC6；氨基酸序列如序列表中序列25所示的泛素结合酶UBC35；氨基酸序列如序列表中序列27所示的泛素结合酶UBC19；氨基酸序列如序列表中序列29所示的泛素结合酶UBC16；氨基酸序列如序列表中序列31所示的泛素结合酶UBC22；(3)点突变泛素蛋白UbK48R和点突变泛素蛋白UbK63R；所述点突变泛素蛋白UbK48R的氨基酸序列为将序列表中序列3的第48位的赖氨酸替换为精氨酸后所得的序列；所述点突变泛素蛋白UbK63R的氨基酸序列为将序列表中序列3的第63位的赖氨酸替换为精氨酸后所得的序列。