一种采用基因敲除法构建基于鱼类CRISPR/Cas9系统的载体及其构建方法

摘要

一种采用基因敲除法构建基于鱼类CRISPR/Cas9系统的载体及其构建方法，它涉及一种基于鱼类CRISPR/Cas9系统的载体及其构建方法。本发明要解决现有转基因方法将外源DNA通过显微注射法、电穿孔法、精子载体法等手段导入细胞中，随机整合，难以确定转基因插入所在的基因组中的位置，且存在安全隐患，以及现有基因敲除方法存在流程繁琐、对技术的要求很高，费用大，试验周期长，成功率受多方面因素限制的问题，本发明通过注射非整合的pX330-MSTN a和pX330-MSTN b两种敲除载体，共同注射入鱼类1-2细胞期受精卵，即可实现高效、快速基因敲除。

主权项

一种采用基因敲除法构建基于鱼类CRISPR/Cas9系统的载体，其特征在于所述的载体包含骨架载体、MSTN a片段和MSTN b片段；MSTN a的第一个外显子的核苷酸序列如序列表Seq ID No：1所示，MSTN b的第一个外显子的核苷酸序列如序列表Seq ID No：2所示。