检测核酸

摘要

本申请提供了检测目标核酸的方法和材料。提供了例如，用于检测目标核酸存在与否的方法和材料，用于检测存在于样品中的目标核酸量的方法和材料，用于检测目标核酸存在与否的试剂盒，用于检测存在于样品中的目标核酸量的试剂盒，以及制备这样的试剂盒的方法。

主权项

一种非诊断性的评估样品中的目标核酸的方法，其特征在于，所述方法包括：(a)使所述样品与探针核酸接触，所述探针核酸包含起始限制性内切核酸酶和与所述目标核酸在下述条件下互补的核苷酸序列：如果所述目标核酸存在于所述样品中，所述目标核酸的至少一部分与所述探针核酸的至少一部分杂交，形成含有识别性限制性内切核酸酶对应的限制性内切核酸酶酶切位点的核酸的双链部分，(b)使所述来自步骤(a)的核酸的双链部分与识别性限制性内切核酸酶接触，所述识别性限制性内切核酸酶能在下述条件下在所述识别性限制性内切核酸酶对应的限制性内切核酸酶酶切位点处切开所述核酸的双链部分：所述识别性限制性内切核酸酶在所述识别性限制性内切核酸酶对应的限制性内切核酸酶酶切位点切开所述核酸的双链部分，从而使所述探针核酸中含有所述起始限制性内切核酸酶的部分与所述探针核酸的至少另一部分分离；(c)使所述来自步骤(b)的探针核酸中含有所述起始限制性内切核酸酶的所述部分与第一核酸接触，所述第一核酸包含第二限制性内切核酸酶和核酸的双链部分，所述双链部分包含所述起始限制性内切核酸酶的限制性内切核酸酶酶切位点，所述接触的条件是所述起始限制性内切核酸酶在所述起始限制性内切核酸酶的限制性内切核酸酶酶切位点切开所述第一核酸，从而将包含所述第二限制性内切核酸酶的所述第一核酸的部分与所述第一核酸的至少另一部分分离；(d)使所述来自步骤(c)的包含所述第二限制性内切核酸酶的所述第一核酸的所述部分与第二核酸接触，所述第二核酸包含所述起始限制性内切核酸酶和核酸的双链部分，所述双链部分包含所述第二限制性内切核酸酶的限制性内切核酸酶酶切位点，所述接触的条件是所述第二限制性内切核酸酶在所述第二限制性内切核酸酶的所述限制性内切核酸酶酶切位点切开所述第二核酸，从而使含有所述起始限制性内切核酸酶的所述第二核酸的部分与所述第二核酸的至少另一部分分离；(e)使所述来自步骤(d)的包含所述起始限制性内切核酸酶的所述第二核酸的所述部分与报道核酸接触，所述报道核酸包含核酸的双链部分，所述双链部分包含所述起始限制性内切核酸酶的限制性内切核酸酶酶切位点，所述接触的条件是所述起始限制性内切核酸酶在所述起始限制性内切核酸酶的所述限制性内切核酸酶酶切位点切开所述报道核酸，从而将所述报道核酸的一部分与所述报道核酸的至少另一部分分开，和(f)确定所述来自步骤(e)的报道核酸的部分的存在与否，其中所述报道核酸的所述部分的存在表明所述样品含有所述目标核酸，其中所述报道核酸的所述部分不存在表明所述样品不含所述目标核酸。