一种甲酰胺酚嗪生物杀菌剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种甲酰胺酚嗪生物杀菌剂的制备方法，(1)将绿针菌营养体置紫外光下照射后得到突变株；(2)将黄豆粉、酵母粉和自来水混合，加热过滤；(3)向滤液中加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁，搅拌溶解后用氢氧化钠调节溶液pH值，分装入三角瓶，加热至120-125℃灭菌；(4)将突变株进行一环斜面菌苔接种，得到含甲酰胺酚嗪单组分的菌株；(5)利用高效液相和含药平皿法筛选甲酰胺酚嗪单组分最高的菌株为产品。本发明适用于防治大量产孢的植物病原真菌，如灰霉病病菌和叶霉病菌引起的真菌病害，采用最常规的叶面喷雾法进行田间防治，防效70-80％。

主权项

一种甲酰胺酚嗪生物杀菌剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，以下物质都是用质量份数表示：(1) 取生长阶段的保藏编号的cfcc 10466绿针假单胞菌菌株营养体，置于波长在280‑320纳米,的紫外线灯照射12‑18h，得到突变株；(2) 将2份黄豆粉、0.2份酵母粉和50‑60份自来水混合，再加热至90‑100℃，然后进行过滤，得到的滤渣中再加入3份自来水，继续过滤1‑2次； (3) 向过滤后的滤液中加入0.3‑0.4份葡萄糖、0.25‑0.35份蛋白胨、0.04‑0.07份磷酸二氢钾、0.02‑0.04份硫酸镁，搅拌溶解，再向其中加入1.2‑1.8份玉米淀粉和5.3份自来水，混合得到溶液，用摩尔浓度为5‑7mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH 值为7.5‑7.8，得到预培养液，将预培养液分装入三角瓶中，塞好瓶塞，将三角瓶加热至120‑125℃，灭菌20‑40min，得到培养液； (4) 控制温度为28‑30℃，搅拌速度为180‑200rpm，将步骤(1) 中得到的突变株在培养液中进行一环斜面菌苔接种，培养时间为30‑40h，得到含甲酰胺酚嗪单组分的菌株；(5) 采用高效液相色谱分析仪筛选，具体方法步骤如下：A色谱条件：色谱柱：C₁₈柱，250×4.6mm，5μm流动相：70%乙腈‑30%辛烷磺酸钠溶液紫外检测器的检测波长：320nm流动相流速：1.0mL/min，柱温30℃进样体积：20μLB标样溶液的配制称取甲酰胺酚嗪标样约0.05g，精确至0.0002g，于100mL容量瓶中，加适量乙腈溶解，在超声波浴槽中振荡15min，恢复至室温，定容，摇匀；用移液管准确吸取该溶液5mL于50mL容量瓶中，用乙腈定容，摇匀；C试样溶液的配制称取甲酰胺酚嗪试样约0.05g，精确至0.0002g，于100mL容量瓶中，加适量乙腈溶解，在超声波浴槽中振荡15min，恢复至室温，定容，摇匀；用移液管准确吸取该溶液5mL于50mL容量瓶中，用乙腈定容，摇匀；D测定在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针的甲酰胺酚嗪峰面积相对变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定；E计算试样中甲酰胺酚嗪的质量分数X₁（%）按式（1）计算：式中：A₁——两针标样溶液中甲酰胺酚嗪峰面积的平均值；A₂——两针试样溶液中甲酰胺酚嗪峰面积的平均值；m₁——标样的质量，g；m₂——试样的质量，g；P ——标样中甲酰胺酚嗪的质量分数，%；F允许差两次测定结果之差，应不大于1.5%，取其算术平均值作为测定结果，筛选出甲酰胺酚嗪 单组分最高的8‑10 个菌株； (6) 利用含药平皿法测定上述菌株的最小抑菌浓度和有效抑菌浓度，将上述菌株定量加入PDA 培养基中，制成含药平皿，然后将沾过叶霉菌孢子悬浮液直径6mm 的无菌滤纸片贴于PDA 培养基表面，25℃下培养3d 后，观察、测量菌落直径，纸片上无叶霉菌长出的浓度为该摇瓶培养液的最小抑菌浓度，以μL/mL 表示；用游标卡尺测量各菌落直径，样品浓度以log 值计，菌落平均直径转为抑菌机率值，计算出剂量浓度与抑菌机率值的回归方程，得到有效抑菌浓度，利用该方法筛选出2个杀菌活性最高的菌株，即为产品。