一种蛋白质定量方法

摘要

本发明涉及一种使用pH选择性二甲基化标记和一级二级谱结合定量的蛋白质定量方法。包括：选择性二甲基化标记、使用mascot distiller软件对一级谱肽段定量、使用“force-find”程序对二级谱肽段定量。蛋白质样品首先使用胰蛋白酶进行酶解；酶解产物先于酸性条件下在反相捕集柱上进行选择性的N-端氨基二甲基化标记；然后在碱性条件下在反相捕集柱上对肽段侧链氨基进行二甲基化标记；以精氨酸结尾的肽段使用mascot distiller进行定量；以赖氨酸结尾的肽段使用“force-find”程序进行定量。本发明的优点是与传统的基于b,y离子的两端标记二级谱定量方法相比，其操作较为简单，标记效率高，标记选择性好，定量精密度、准确度、覆盖度高。

主权项

一种蛋白质定量方法，其是使用pH选择性二甲基化标记和一级二级谱结合定量的蛋白质定量方法，包括：蛋白胰蛋白酶酶解产物在反相柱上于酸性条件下标记肽段末端氨基，反相柱上于碱性条件下标记肽段侧链氨基；将标记完成的肽段洗脱下来进行质谱分析，对质谱分析得到的结果文件进行数据库搜索，使用mascot distiller软件对一级谱肽段定量、使用文献报道的“force‑find”程序对二级谱肽段定量；结合一级谱信息和二级谱信息对蛋白进行定量分析。