HCoV-NL63株全长cDNA感染性克隆及相关RNA病毒载体

摘要

本发明通过病毒RNA提取、RT-PCR、克隆测序的方法首次获得了HCoV-NL63国内株全长基因组序列信息，并且该国内株处于一个新的基因型。在此基础上，通过体外连接、体外转录、电转染宿主细胞的方法获得了HCoV-NL63国内株全长cDNA的感染性克隆。通过对非结构蛋白基因ORF3进行置换，替换为绿色荧光蛋白基因GFP并实现了对含有GFP外源基因的全长cDNA的病毒拯救，并证明了ORF3在病毒体外细胞培养中为复制所非必需。该感染性克隆可用于人冠状病毒病原生物学研究与新型疫苗与药物的研发。基于该感染性克隆的RNA病毒载体可用于表达其他外源蛋白，用于疫苗与药物研发。

主权项

本发明所述的HCoV‑NL63中国株全长cDNA感染性克隆及相关RNA病毒载体，其技术特征是以NL63国内株全基因组信息为基础，将外源基因插入或置换到该RNA病毒载体中进行病毒拯救，实现对外源基因或蛋白的表达，以此作为开发病毒载体疫苗或药物研发的RNA病毒载体。