一种猪圆环病毒灭活疫苗的灭活检验方法

摘要

本发明涉及一种猪圆环病毒灭活疫苗的灭活检验方法，包括以下步骤：1)将灭活后的猪圆环病毒液在PK-15细胞上吸附40min；2)吸附后，在细胞瓶中加入营养维持液，将细胞瓶置于37℃的CO₂培养箱中继续培养3天后，收获细胞培养液，并冻融3次；3)连续盲传3代，做荧光抗体染色，以PK-15健康细胞作阴性对照，在荧光显微镜下观察判定，以不出现特异性的绿色荧光为合格样品，出现特异性的绿色荧光为不合格样品。本发明既能使可能未灭活彻底的病毒充分繁殖而被检出，又能避免灭活后的猪圆环病毒液直接接种PK-15细胞引起细胞死亡脱落的问题，因而能更准确检验出经过灭活后的抗原是否被彻底灭活。

主权项

一种猪圆环病毒灭活疫苗的灭活检验方法，其特征在于：所述的检验方法包括以下步骤： 1) 用细胞瓶培养PK‑15细胞18‑24h，生长密度达50‑80%时，弃去营养生长液，将灭活后的猪圆环病毒液做10倍稀释后，取1‑2mL接种于细胞瓶中，将细胞瓶置37℃的CO₂培养箱中，使灭活后的猪圆环病毒液在PK‑15细胞上吸附40min，期间振摇1‑2次；2) 吸附后，在细胞瓶中加入营养维持液，将细胞瓶置于37℃的CO₂培养箱中继续培养3天后，收获细胞培养液，并冻融3次；3) 取冻融后的细胞培养液1‑2mL，同样接种于传代并已生长18‑24h，生长密度达50‑80%的PK‑15细胞上吸附40min后，在细胞瓶中加入营养维持液，将细胞瓶置于37℃的CO₂培养箱中继续培养3天后，收获细胞培养液，冻融3次；依此法连续盲传3代，取第1代、第2代和第3代或只取第3代的细胞培养液接种于接近单层的细胞板上继续培养2‑3天后，做荧光抗体染色，以PK‑15健康细胞作阴性对照，在荧光显微镜下观察判定，以不出现特异性的绿色荧光为合格样品，出现特异性的绿色荧光为不合格样品；所述的营养生长液、营养维持液在细胞瓶中加入量为细胞瓶容量的1/10；营养生长液、营养维持液为MEM粉剂细胞培养基用超纯水配成液体，经消毒、灭菌后，加入犊牛或胎牛血清，营养生长液中含有犊牛或胎牛血清量为8‑10%；营养维持液中含有犊牛或胎牛血清量为2‑4%，调节pH值为7.4‑7.8而成，用于维持细胞、病毒的生长、繁殖。