利用基于UBE3基因的核苷酸分子式鉴定核桃属植物的方法

摘要

本发明公开了一种鉴定或辅助鉴定待测核桃属植物的方法。该方法包括如下步骤：1）以待测核桃属植物的基因组DNA为模板，用由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR产物；2）将所述PCR产物测序，根据测序结果列出所述待测核桃属植物的核苷酸分子式；3）将步骤2）所得所述待测核桃属植物的核苷酸分子式与对应的若干个种的核苷酸分子式进行比对，从而确定所述待测核桃属植物的种。实验证明，该方法精确、操作简捷，可以提高相关产业的生产效率和质量监控水平，有效弥补以往方法的不足；另外，该方法同时实现了非果期（如苗期）的鉴定。本发明对于促进核桃种质资源的保护、利用及育种均具有重要意义。

主权项

一种鉴定或辅助鉴定待测核桃属植物的方法，包括如下步骤：(1)以待测核桃属植物的基因组DNA为模板，用由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR产物；(2)将所述PCR产物测序，根据测序结果列出所述待测核桃属植物的核苷酸分子式；所述待测核桃属植物的核苷酸分子式的通式为：B₁₄B₅₇B₉₇B₂₉₄B₂₉₆B₃₃₅B₃₆₉B₄₂₉B₄₃₁B₄₉₄B₅₁₈B₅₆₇B₅₉₄B₆₃₅B₆₆₆；在所述通式中，所述B₁₄、所述B₅₇、所述B₉₇、所述B₂₉₄、所述B₂₉₆、所述B₃₃₅、所述B₃₆₉、所述B₄₂₉、所述B₄₃₁、所述B₄₉₄、所述B₅₁₈、所述B₅₆₇、所述B₅₉₄、所述B₆₃₅和所述B₆₆₆，依次表示在所述PCR产物的核苷酸序列中，将所述PCR产物的核苷酸序列自5’端的第56个碱基记为第1个碱基，沿着所述PCR产物的核苷酸序列向3’端方向顺次计数的第14、57、97、294、296、335、369、429、431、494、518、567、594、635和666个碱基；在所述通式中，每一个B为A、T、C和G四种碱基中的一种或两种的叠加；(3)将步骤(2)所得所述待测核桃属植物的核苷酸分子式与核苷酸分子式组I进行比对；所述核苷酸分子式组I由如下a1)‑a7)共7种核苷酸分子式组成：a1)W₁₄R₅₇R₉₇A₂₉₄W₂₉₆Y₃₃₅Y₃₆₉M₄₂₉Y₄₃₁C₄₉₄R₅₁₈C₅₆₇Y₅₉₄C₆₃₅Y₆₆₆；a2)T₁₄A₅₇A₉₇A₂₉₄A₂₉₆C₃₃₅C₃₆₉A₄₂₉T₄₃₁C₄₉₄A₅₁₈C₅₆₇C₅₉₄C₆₃₅C₆₆₆；a3)A₁₄G₅₇G₉₇A₂₉₄T₂₉₆T₃₃₅T₃₆₉C₄₂₉C₄₃₁C₄₉₄G₅₁₈C₅₆₇T₅₉₄C₆₃₅T₆₆₆；a4)A₁₄G₅₇A₉₇A₂₉₄T₂₉₆T₃₃₅T₃₆₉C₄₂₉C₄₃₁C₄₉₄G₅₁₈C₅₆₇T₅₉₄C₆₃₅T₆₆₆；a5)T₁₄G₅₇A₉₇G₂₉₄T₂₉₆T₃₃₅C₃₆₉A₄₂₉C₄₃₁T₄₉₄G₅₁₈C₅₆₇T₅₉₄T₆₃₅T₆₆₆；a6)T₁₄G₅₇A₉₇G₂₉₄T₂₉₆T₃₃₅C₃₆₉A₄₂₉C₄₃₁T₄₉₄G₅₁₈T₅₆₇T₅₉₄T₆₃₅T₆₆₆；a7)T₁₄G₅₇A₉₇G₂₉₄T₂₉₆T₃₃₅C₃₆₉A₄₂₉C₄₃₁T₄₉₄G₅₁₈C₅₆₇T₅₉₄C₆₃₅T₆₆₆；在a1)中，W表示碱基A和T；R表示碱基A和G；Y表示碱基T和C；M表示碱基A和C；(4)根据步骤(3)的比对结果，按照如下方法对所述待测核桃属植物进行鉴定：若所述待测核桃属植物的核苷酸分子式为a1)所示的核苷酸分子式，则所述待测核桃属植物为或候选为麻核桃(Juglans hopeiensis)；若所述待测核桃属植物的核苷酸分子式为a2)所示的核苷酸分子式，则所述待测核桃属植物为或候选为核桃楸(Juglans mandshurica)；若所述待测核桃属植物的核苷酸分子式为a3)所示的核苷酸分子式，则所述待测核桃属植物为或候选为核桃(Juglans regia)；若所述待测核桃属植物的核苷酸分子式为a4)所示的核苷酸分子式，则所述待测核桃属植物为或候选为泡核桃(Juglans sigillata)；若所述待测核桃属植物的核苷酸分子式为a5)所示的核苷酸分子式，则所述待测核桃属植物为或候选为美国东部黑核桃(Juglans nigra)；若所述待测核桃属植物的核苷酸分子式为a6)所示的核苷酸分子式，则所述待测核桃属植物为或候选为魁核桃(Juglans major)；若所述待测核桃属植物的核苷酸分子式为a7)所示的核苷酸分子式，则所述待测核桃属植物为或候选为美国北加州黑核桃(Juglans hindsii)。