核酸的检测

摘要

本发明提供修饰的寡核苷酸以及其用于在核酸的检测中使用的方法。所述寡核苷酸和方法具体应用于扩增和/或检测靶核酸序列中的遗传变异的区域。

主权项

一种用于确定样品中靶多核苷酸的存在或不存在的方法，所述方法包括：提供引物寡核苷酸，所述引物寡核苷酸包含第一引物组分，所述第一引物组分终止于所述寡核苷酸的5’端并且能够通过互补碱基配对与所述靶多核苷酸的链的第一部分杂交，以及第二引物组分，所述第二引物组分终止于所述寡核苷酸的3’端并且能够通过互补碱基配对与所述靶多核苷酸链的第二部分杂交；使潜在包含所述靶多核苷酸的样品与所述引物寡核苷酸在适合于所述第一引物组分和所述第二引物组分与所述靶多核苷酸链杂交的条件下相接触，以便由此形成双链的双链体，其中所述双链体的中间区段的至少一条链包含至少四个核苷酸的序列，所述至少四个核苷酸的序列由于所述中间区段的相对链中不存在与所述至少四个核苷酸的序列共有碱基对互补性的核苷酸序列而保持与所述中间区段的所述相对链未杂交；使所述样品与能够使用所述靶多核苷酸链作为模板的聚合酶相接触以便延伸所述双链体的所述引物寡核苷酸的长度并且由此产生包含位于第一端组分与第二端组分中间的内部组分的扩增子，其中所述扩增子的所述第一端组分能够通过互补碱基配对与所述靶多核苷酸链的所述第一部分杂交，所述扩增子的所述第二端组分能够通过互补碱基配对与所述靶多核苷酸链的所述第二部分杂交，以及所述扩增子的所述第一端组分和所述第二端组分与所述靶多核苷酸链的所述杂交使所述扩增子的所述内部组分定位成与所述靶多核苷酸链中、位于所述靶多核苷酸链的所述第一部分与所述第二部分之间的中间核苷酸序列相对，所述中间核苷酸序列不与所述内部组分共有碱基对互补性；以及检测是否产生所述扩增子，其中检测到所述扩增子指示所述样品中存在所述靶多核苷酸，并且未能检测到所述扩增子指示所述样品中不存在所述靶多核苷酸。