一种人体液真菌（1,3）-β-D葡聚糖检测试剂盒及其应用方法

摘要

本发明提供了一种可产业化生产的，准确、快速、特异性高的人体液真菌（1,3）-β-D葡聚糖检测试剂盒，其特征在于包括：反应主剂、体液处理剂、碱性稀释液、酸性稀释液、无菌水、冻干血清和（1,3）-β-D-葡聚糖质控品,所述反应主剂含有东方鲎血细胞G因子、凝固酶凝固酶原和促活剂。本发明的检测方法简便、快速、安全，80分钟内可完成10人份的体液样本的（1,3）-β-D-葡聚糖检测，鉴别符合率达100%，且特异性高，可在同一反应时间内鉴别真菌（1,3）-β-D葡聚糖与细菌内毒素。

主权项

一种人体液真菌(1,3)‑β‑D‑葡聚糖检测试剂盒，其特征在于包括：反应主剂、体液处理剂、碱性稀释液、酸性稀释液、无菌水、冻干血清和(1,3)‑β‑D‑葡聚糖质控品,所述反应主剂含有东方鲎血细胞G因子、凝固酶原和促活剂；所述反应主剂通过包括以下步骤的方法制备：(1)将活体鲎用酒精消毒心门，加抗凝剂后采血，离心收集鲎血细胞，所述抗凝剂与鲎血的体积比为1：6～1：10；(2)加裂解液裂解所收集的鲎血细胞，获得鲎血细胞溶解物；(3)分离细胞壁，用有机溶媒氯仿(CHCl₃)提取鲎血细胞溶解物，按体积比加入1:0.8～1:1.2的氯仿和聚乙二醇8000，使每毫升含聚乙二醇1.5～3mg，随即混合45～60分钟，然后1500r/min‑3000r/min离心30～40分钟，制得反应主剂G因子、凝固酶原活性成分；(4)加入促活剂，按鲎血细胞提取物体积与促活剂体积比为1:0.3～1:0.5的比例加入，搅拌均匀，得到反应主剂半成品，所述促活剂是在纯化水中加入KCl、MgSO₄溶液或者KCl、CaCl₂溶液，使得每毫升促活剂含KCl 0.15～0.30M，含MgSO₄0.15～0.30M或含CaCl₂0.20～0.40M，过滤分装，用流通蒸汽消毒30～40分钟即可；(5)将配制的反应主剂半成品搅拌均匀‑45℃～‑55℃真空冷冻干燥后20～25℃封口，制得反应主剂成品。