一种检测蛋白质二硫键是否断裂的方法

摘要

一种检测蛋白质二硫键是否断裂的方法，是采用碘乙酸与蛋白质中的游离巯基反应，通过超滤去除未反应的碘乙酸，再运用二硫苏糖醇切断蛋白质中的二硫键，进而采用碘乙酰胺与新产生的巯基反应，运用胰蛋白酶将蛋白质水解成多肽，借助高分辨率质谱检测多肽的质荷比信息，与天然蛋白质的二硫键信息进行对比，确定二硫键是否发生断裂。本发明可有效用于确定巯基是以游离或者二硫键的形式存在；碘乙酸和碘乙酰胺与巯基反应后引起的质量差在1Da以内，因此运用高分辨率质谱能十分准确的断定二者的差别；蛋白质二硫键是否发生断裂的准确判断能为相关理论研究奠定基础，为特定的蛋白质修饰及实际生产提供理论依据。

主权项

一种检测蛋白质二硫键是否断裂的方法，其特征是：A、蛋白质游离巯基与碘乙酸反应；B、二硫苏糖醇断裂蛋白质二硫键；C、碘乙酰胺与经二硫苏糖醇断裂二硫键得到的巯基反应；D、胰蛋白酶酶解蛋白质；E、高分辨率质谱检测；F、数据分析。