一种通过体外小分子诱导培养尿源性多潜能干细胞的方法

摘要

本发明公开了一种通过体外小分子诱导培养尿源性多潜能干细胞的方法，包括从人尿液样品中获得尿源性细胞，对得到的原代细胞进行体外小分子诱导和培养获得贴壁生长的P1代hUSCs克隆，挑取生长状态良好的hUSCs克隆进行接种，并继续传代培养，获得细胞呈现长梭形，状态良好的hUSCs。采用本方法制备的hUSCs经诱导可定向分化为成骨细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞、神经细胞、成纤维细胞或平滑肌细胞，对糖尿病下肢缺血模型进行体内移植hUSCs，研究结果表明其能显著增强缺血部位的血流恢复和血管新生。本方法制备的hUSCs可应用于治疗和修复糖尿病及并发症、心脑肾血管疾病、阿尔兹海默症、骨质疏松、关节炎等病变组织与器官的修复，以及泌尿系统肿瘤预警与细胞药物的筛选。

主权项

一种通过体外小分子诱导培养尿源性多潜能干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)尿源性细胞的分离将获取的人尿液样品进行离心，沉淀用PBS洗1‑3遍后，离心，弃上清，用培养液重悬细胞，得到尿源性细胞；(2)尿源性细胞的原代培养将得到的尿源性细胞接种于含有培养液的24孔板中，置于细胞培养箱内培养，洗弃未贴壁的细胞，更换新的培养液继续培养贴壁细胞，获得贴壁生长的P0代圆形细胞；(3)化学小分子诱导重编程获得P1代尿源性多潜能干细胞选择步骤(2)培养的得到的状态佳的细胞接种于含有培养液的六孔板中，细胞贴壁生长后，采用两步诱导法，第一步，向培养液中添加5‑氮杂‑2'‑脱氧胞嘧啶核苷(5‑AZA)诱导培养1‑3天；第二步，向含有5‑氮杂‑2'‑脱氧胞嘧啶核苷的培养液中添加3‑Deazaneplanocin A(DZNeP)以及维生素C进行诱导，每4天换一次诱导培养液，10‑14天完成化学小分子诱导细胞重编程，获得贴壁生长的圆形或短梭形且具有无限增殖和多向分化潜能的细胞，即为P1代尿源性多潜能干细胞克隆；(4)P0代尿源性多潜能干细胞的传代培养挑选小分子诱导获得的P1代尿源性多潜能干细胞克隆，接种转移至含有培养液的6孔板中继续培养，细胞生长至90％融合转移至含有相同培养液的9cm平皿中进行传代培养，通过连续传代之后，获得呈现长梭形，状态良好的细胞，即为尿源性多潜能干细胞。