含有脐带间充质干细胞分泌的多种蛋白的骨基质材料及制备方法

摘要

本发明涉及一种含有脐带间充质干细胞分泌的多种蛋白的骨基质材料及制备方法，该材料为在同种异体脱钙骨基质表面接种有分泌出成骨诱导功能蛋白而促进成骨的脐带间充质干细胞的动物骨基质材料。该骨基质材料具有骨组织的天然结构和特性以及良好的成骨诱导效果，在骨缺损修复中具有更强的促进成骨作用，该骨基质材料有助于组织工程骨的规模化制备和临床应用。

主权项

含有脐带间充质干细胞分泌的多种蛋白的骨基质材料的制备方法，其特征在于，该材料为在同种异体脱钙骨基质表面接种有分泌出成骨诱导功能蛋白而促进成骨的脐带间充质干细胞的动物骨基质材料，其制备方法有以下步骤：1）取同种异体骨基质材料，脱钙：在密闭容器中盛入0.2～0.6M 盐酸，按5ml/g骨基质投入其中浸泡，在常温下，浸泡24小时，每8小时更换盐酸一次，放入无菌蒸馏水中反复冲洗浸泡，直至PH≈7；2）步骤1）得到的骨基质材料用钴‑60γ射线灭菌，置‑80℃深低温冻存；3）步骤2）所述的灭菌冻存的骨基质材料，室温下，用DMEM/F12培养液浸泡，每隔2天更换一次培养液，至培养液不再变色，取出，放入37℃孵箱中蒸干骨基质材料中的水分；4）获取脐带间充质干细胞；5）扩增脐带间充质干细胞得到P0、P1、P2、P3、P4、P5代细胞；6）P3‑ P5代的脐带间充质干细胞按1～3×10⁷/mL接种于步骤3）得到骨基质上，放置在细胞培养板内孵育2h，再加入DMEM/F12培养液继续培养12d，得到接种有脐带间充质干细胞的骨基质材料；7）步骤6）接种有脐带间充质干细胞的骨基质材料，进行无菌冷冻干燥24h的脱细胞处理，得到脐带间充质干细胞分泌的多种成骨诱导蛋白的基质材料。