一种高纯度酪蛋白磷酸肽制备方法

摘要

一种高纯度酪蛋白磷酸肽制备方法，是将酪蛋白加水溶解，用胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶任意四中组成的复合蛋白酶和胃蛋白酶进行二次酶解，经杀菌，过滤后再经阳离子交换树脂和阴离子交换树脂二次纯化处理，用水洗弃去水洗液后，再用浓度为0.5%-1%的盐酸洗脱，纳滤膜脱盐、干燥而成。本发明可以有效提高酪蛋白磷酸肽的得率（≥17%）和纯度（≥90%），所制得的酪蛋白磷酸肽无苦味，水溶性好、20%CPP的水溶液澄清透明，颜色为纯白色粉末。本发明制备的乳源性酪蛋白磷酸肽的分子量主要在1000-5000之间，有利于人体吸收，是一种成本低，工艺简单的制备方法，适合工业化生产。

主权项

一种高纯度酪蛋白磷酸肽制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）加酪蛋白6‑10倍质量的水，在40℃‑50℃条件下搅拌溶解；（2）加入复合蛋白酶进行酶解，酶解条件为：加酶量为酪蛋白质量的0.05%‑0.2%，反应温度40℃‑50℃，反应时间1 h ‑2h， pH 7.0‑9.0，所述复合蛋白酶为胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和凝乳蛋白酶混合物，或是中性蛋白酶、碱性蛋白酶、凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物，复合蛋白酶酶解之后，再添加酪蛋白质量的0.05%‑0.1%的胃蛋白酶在温度40℃‑50℃、pH值4.0‑5.0下再酶解1h‑2h；（3）将温度调节至80~90℃，保温20 min‑30 min，进行灭菌；（4）调pH值4.0‑5.0，过滤除去未酶解的大分子蛋白沉淀；（5）上清液调整pH为4.0‑5.0，使用阳离子交换树脂吸收纯化1h‑4h，过滤，滤液调整纯化液pH为6.0‑7.0，再使用阴离子交换树脂进行纯化1h‑4h，先用水洗，弃去水洗液后，再用浓度为0.5%‑1%的盐酸洗脱；（6）洗脱液利用超滤膜分离出酪蛋白磷酸肽，再用纳滤膜脱盐，得到小于5000D的酪蛋白磷酸肽液；（7）经过冷冻干燥、喷雾干燥、真空干燥的任意一种，对得到的产物进行干燥成粉。