一种谷胱甘肽转移酶抗原生物传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种谷胱甘肽转移酶抗原生物传感器的制备方法及应用，属于新型纳米功能材料与生物传感技术领域。具体是基于磺酸化石墨烯（HSO₃-GS）和双金属纳米多孔合金材料铂铁（PtFe），制备的检测谷胱甘肽转移酶的夹心型电化学免疫传感器，用于检测血清中的谷胱甘肽转移酶。其特征在于：（1）磺酸化石墨烯的制备；（2）双金属多孔材料铂铁—辣根过氧化物酶—谷胱甘肽转移酶二抗复合物的制备；（3）电化学免疫传感器的制备。PtFe对H₂O₂具有很强的催化能力，同时利于固定更多的二抗、保持物质生物活性；将电子媒介体天青A加入底液中，避免了修饰到电极上后的泄漏问题，制备的传感器灵敏度高、特异性好、易于操作、检测限低。

主权项

一种谷胱甘肽转移酶抗原生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）双金属纳米多孔材料铂铁（PtFe）的制备将PtFeAl合金片放到装有0.5 ~ 1.0 mol·L^‑1NaOH溶液的小烧杯中，置于恒温水浴中，40 ~ 50℃条件下，放置24 ~ 48 h，将得到的产物用二次水反复洗涤，室温下晾干，即制备出所需的PtFe；（2）PtFe/辣根过氧化物酶/谷胱甘肽转移酶二抗复合物（PtFe/HRP/Ab₂）制备将PtFe悬浮液超声，移取悬浮液、HRP溶液和Ab₂溶液于一离心管中，体积比为PtFe: HRP : Ab₂ = 1 : 0.5 ~ 2 : 0.5 ~ 2进行混合，4℃条件下，进行振荡孵化，孵化12 ~ 24 h后，置于4 ℃冰箱中保存待用；（3）电化学免疫传感器的制备，步骤如下：1）将直径4 mm 的玻碳电极依次用1.0、0.3和0.05 mm 的三氧化二铝抛光粉抛光处理，乙醇超声清洗，再用超纯水冲洗干净，然后将电极置于5 mmol·L^‑1铁氰化钾溶液中，在－0.2 ~ 0.6 V电位下扫描，使峰电位差小于80 mV；2）将壳聚糖分散的HSO₃‑GS修饰于玻碳电极表面，室温干燥；3）将谷胱甘肽转移酶一抗（Ab₁）滴涂到步骤2）HSO₃‑GS修饰的电极表面，置于4℃湿润条件下晾干；4）将浓度为100 µg·mL^‑1牛血清白蛋白滴涂到步骤3）Ab₁修饰的电极表面，4℃下湿润条件下晾干；5）将谷胱甘肽转移酶抗原（GST）滴涂在步骤4）牛血清白蛋白修饰的电极表面，4℃下湿润条件下晾干；6）将PtFe/HRP/Ab₂滴涂在步骤5）GST修饰的电极表面，4℃下湿润条件下晾干，电化学免疫传感器制备完成。