一种瘤果槲寄生苦石莲悬浮细胞培养的快速繁殖方法

摘要

本发明研究了一种瘤果槲寄生悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养及调控等步骤，本发明方法所制备的瘤果槲寄生悬浮细胞增殖率高，生长周期短，次生代谢物含量高，为瘤果槲寄生的开发和利用提供研究基础。

主权项

一种瘤果槲寄生悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养及调控，其主要步骤如下：（1）取瘤果槲寄生幼嫩的叶片，在超净工作台上对其进行消毒处理；（2）取步骤（1）消毒处理过的叶片接入DCR+NAA0.25mg/L+6‑BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2,4‑D3.0mg/L+L‑谷胺酰胺50mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加6.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，暗光照，温度25℃，湿度60%；（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织，接入DCR+NAA0.5mg/L+ZT0.1mg/L+2,4‑D2.0mg/L+L‑谷胺酰胺50mg/L培养基中进行愈伤组织增殖，附加6.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，光照2000lx，温度25℃，湿度60%；（4）取步骤（3）生长良好，长势均一的愈伤组织，称取0.2g加入改良DCR+NAA0.5‑0.8mg/L+6‑BA3.5‑4.0mg/L+2,4‑D2.0mg/L+5‑磺基水杨酸1%‑2%培养基中震荡培养，培养一定时间后，取出样品，用滤纸吸干细胞表面水分。