抗耐药性金黄色葡萄球菌的抗菌肽MP1102、其制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种抗耐药性金黄色葡萄球菌的新型抗菌肽MP1102，其对金黄色葡萄球菌，包括MRSA，具有强烈的杀菌活性。对编码抗菌肽MP1102的基因进行优化，构建pPICZαA-MP1102重组表达载体，经BglII线性化转化毕赤酵母X-33，获得MP1102高水平表达重组酵母菌株M5，实现了MP1102在毕赤酵母X-33中高水平分泌表达，建立M5转化子高密度发酵体系，总蛋白浓度、抗菌肽MP1102浓度及生物量检测结果显示，25℃，120h发酵后总蛋白浓度达到809mg/L，抗菌肽MP1102浓度达到420mg/L，占总蛋白比例为52%，生物量达到353g/L。MP1102具有开发为新一代抗菌药物的潜力。

主权项

一种制备抗耐药性金黄色葡萄球菌的抗菌肽MP1102的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)基因表达框的设计：对抗菌肽MP1102的编码基因进行酵母偏爱密码子优化，在优化后的基因序列的N端插入信号肽切割位点kex2，将两个TAA终止密码子插入该序列的C端，并在两端分别添加XbaI、XhoI酶切位点，在酶切位点两端分别插入保护碱基，所得基因表达框的核苷酸序列如SEQ ID No:3所示；2)重组酵母表达载体的构建：将SEQ ID No:3所示的基因经XbaI和XhoI双酶切后，与经过同样双酶切的pPICZαA载体连接，得到的重组酵母表达载体pPICZαA‑MP1102；3)重组酵母菌的制备：载体pPICZαA‑MP1102经线性化后转化感受态毕赤酵母X‑33，筛选出高水平表达抗菌肽MP1102的重组酵母菌；4)抗菌肽MP1102的制备：对步骤3)中获得的重组酵母菌进行发酵培养，离心发酵液，收集上清，上清经纯化后即得抗菌肽MP1102。