凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法

摘要

本发明提出了一种凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法，包括：(a)斜面菌体活化；（b）凝结芽孢杆菌的种子罐培养；（c）凝结芽孢杆菌的固体发酵；将步骤（b）中的培养基按1%～10%的重量比接入固体发酵培养基中，采用半封闭式发酵48～72h。本发明采用半封闭式固体发酵工艺，在发酵过程中物料处于半封闭状态，与少量空气接触，生长期可以充分利用残余氧气使凝结芽孢杆菌菌体大量繁殖，生长后期氧气大量减少，刺激芽孢快速形成，同时可以代谢较多的L-乳酸，解决发酵过程中产酸不足的情况，通过夺氧作用抑制杂菌的生长，解决固体发酵污染的情况。

主权项

一种凝结芽孢杆菌的芽孢制剂的制备方法，包括：(a)斜面菌体活化将凝结芽孢杆菌ACCC10229接种至一级斜面培养基上，30℃～45℃培养20～32h；(b)凝结芽孢杆菌的种子罐培养将步骤(a)中的活化后的凝结芽孢杆菌单菌落接种于二级液体培养基中，装液量为50～100mL/500mL，30℃～45℃、160～300rpm/min条件下培养20～32h；然后将培养后的种子液按体积百分比0.5～10％，在二级液体培养基中30℃～45℃、160～300rpm/min条件下培养20～36h；(c)凝结芽孢杆菌的固体发酵将步骤(b)中的培养基按1％～10％的重量比接入固体发酵培养基中，培养基含水量控制在49％～58％，pH范围在6.0～7.0，曲房相对湿度保持在85％以上，料温控制在30℃～45℃，采用半封闭式发酵48～72h；或者(b’)将步骤(a)中的活化后的凝结芽孢杆菌单菌落接种于二级茄型培养瓶中，30℃～45℃培养36～48h；(c’)按10～15瓶二级茄型培养瓶培养基接入1.0t固体发酵培养基中，培养基含水量控制在49％～58％，pH范围在6.0～7.0，曲房相对湿度保持在85％以上，料温控制在30℃～45℃，采用半封闭式发酵48～72h；其中所述半封闭式发酵指在发酵过程中物料处于半封闭状态，与少量空气接触，生长期充分利用残余氧气使凝结芽孢杆菌菌体大量繁殖，生长后期氧气大量减少。