Inhibición de la subunidad beta3 de los canales de Ca2+ de tipo L

摘要

Un método in vitro para identificar inhibidores de la proteína ß3 del canal de Ca2+ de tipo L, que comprende: a) poner en contacto las células huésped recombinantes de mamífero con un indicador de calcio que emite señales detectables en la presencia de calcio, en donde dichas células huésped se han transfectado con un vector de expresión recombinante que comprende secuencias de ácido nucleico de control operativamente unidas a un gen ß3 del canal de Ca2+ de tipo L y en donde dichas células huésped no poseen canales de Ca2+ de tipo L que contienen la subunidad ß3 funcional; b) tratar dichas células huésped recombinantes de mamífero con uno o más compuestos de prueba, en donde el tratamiento ocurre antes, simultáneo con o después de poner en contacto las células huésped con el indicador de calcio; c) estimular las células huésped recombinantes de mamífero con una cantidad de ATP que es efectiva para incrementar la concentración de calcio intracelular en las células de control; y d) detectar señales del indicador de calcio en las células huésped recombinantes de mamífero, en donde un incremento inducido por el compuesto de prueba en las señales del indicador de calcio en las células huésped recombinantes de mamífero indica que el compuesto de prueba es un inhibidor de la proteína ß3 del canal de Ca2+ de tipo L.