DTT处理结合CHIP与EMSA体内外分析拟南芥HSF1三聚体形成的方法

摘要

本发明公开了一种二硫苏糖醇处理结合染色质免疫沉淀技术与电泳迁移率变动分析体内外分析拟南芥热激转录因子HSF1三聚体形成的方法。在以往的研究中，关于蛋白质分子间二硫键的研究方法主要采用物理化学的方法结合生物信息学进行分析，本方法采用分子生物学的方法，采用二硫键的还原剂二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol，DTT)进行处理HSF1后，再从生物学功能的角度结合染色质免疫沉淀技术(CHIP)与电泳迁移率变动分析(EMSA)体内外研究HSF1的活性状态，从而揭示三聚体形成与二硫键的关系，此方法可以把结构和功能有效的结合，是研究HSF1三聚体形成的有效方法。

主权项

一种DTT处理结合CHIP与EMSA体内外分析拟南芥热激转录因子HSF1三聚体形成的方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤一、逆境处理拟南芥小苗和热激因子HSF1； 步骤二、DTT处理逆境胁迫后拟南芥小苗和纯化的蛋白； 步骤三、将上述各种体内逆境处理和未处理的小苗用甲醛交联和染色质免疫沉淀技术，获得染色质免疫沉淀DNA； 步骤四、利用电泳迁移率变动分析EMSA研究不同逆境在体外对HSF1的激活。