一种暹罗鳄血液提取物及其提取方法和用途

摘要

本发明公开了一种暹罗鳄鱼血液提取物及其提取方法，该提取物是以新鲜鳄鱼动脉血为原料，通过如下步骤提取：a.将鳄鱼血进行抗凝处理，分离血浆；b.饱和硫酸铵法粗提免疫球蛋白；c.DEAE-52阴离子交换层析纯化免疫球蛋白，即得。所提取得的暹罗鳄血液提取物与HIV-1整合酶结合具有特异性，实验证明具有抗HIV-1活性和抗甲型H1N1流感病毒活性的作用，可用于治疗艾滋病和甲型H1N1流感。

主权项

一种暹罗鳄血液提取物，其特征在于该提取物是以新鲜鳄鱼动脉血为原料，通过如下步骤提取：a.将鳄鱼血进行抗凝处理，分离血浆:取经检验合格的新鲜鳄鱼动脉血，用3.8％的柠檬酸钠溶液与血液按体积比1：9混合抗凝，静置1h，将抗凝血置于冷冻离心机，在6℃转速3000 r/min下，离心10min，收集上清液，得到血浆；b. 饱和硫酸铵法粗提免疫球蛋白：1）取血浆，加0.01mol/L、pH值7.0的PBS缓冲溶液，再逐滴加入(NH₄)₂SO₄饱和溶液，边加边搅拌，使成为30％(NH₄)₂SO₄溶液，充分混合后，于4℃下静置1h； 2）在6℃转速10000 r/min下，离心20min，弃去沉淀，以除去纤维蛋白原，得到上清液； 3）在上清液中再加(NH₄)₂SO₄饱和溶液，使(NH₄)₂SO₄终浓度为50％，充分混合，静置2h；4）在6℃转速10000 r/min下，离心20min，得到蛋白沉淀；5）于蛋白沉淀中加0.01mol/L、pH值7.0的PBS缓冲溶液使之溶解，再加(NH₄)₂SO₄饱和溶液，使成33％(NH₄)₂SO₄溶液，充分混合后，于4℃下静置2h； 6）在6℃转速10000 r/min下，离心20min，分别取蛋白沉淀，上清液；7）重复步骤5）和6）2次，收集末次沉淀物即为免疫球蛋白粗提物,以PBS透析除盐，－20℃保存；c.DEAE‑52阴离子交换层析纯化免疫球蛋白：将溶解的免疫球蛋白粗提物经DEAE－52进行纯化，柱长15cm，直径1cm，盐梯度洗脱，缓冲液为pH7.2的buffer A,所述 buffer A配方为 50mM MPB+2M NaCl，所述MPB代表醋酸盐缓冲液：乙睛＝5：95，洗脱时NaCl浓度由0至1.0mol·L^‑1，洗脱流速为0.3mL·min^‑1，每管1.5mL，收集蛋白峰，即得。