一种同时测定三种芳香族氨基酸含量的方法

摘要

本发明公开了一种同时测定三种芳香族氨基酸含量的液相色谱方法，步骤包括：a.选用色谱柱规格为4.6×250mmi.d,5μm的watersC18柱；b.以15%甲醇-85%磷酸盐溶液为流动相，流动相流速为0.9mL/min，待测样品经2%的高氯酸去蛋白后，采用超声提取，离心后调节pH为6.0，取30微升上清液直接进样测定，外标法定量；c.利用二极管阵列检测器对三种芳香族氨基酸的进行检测，一次进样可以同时得到这三种芳香族氨基酸的全波段扫描图谱，采集到三种氨基酸在每一个瞬间的光谱图，直观地鉴定色谱峰的纯度，对比标准品和待测样品的全波段扫描图谱进行定性。本发明操作简便、灵敏度高，定性准确。

主权项

一种同时测定三种芳香族氨基酸含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1） 配制流动相，由15%的甲醇和85%磷酸盐溶液组成，磷酸盐溶液由0.05 mol/L磷酸二氢钾及磷酸氢二钾（1：1）组成，pH范围为6.0～6.3； （2）以规格为4.6×250mm i.d, 5μm的waters C18色谱柱为固定相，i.d为内径； （3）用2%的高氯酸溶液配制三种芳香族氨基酸标准混合储备液；（4）取新鲜水产品肉，用2%的高氯酸匀浆、超声、离心提取；（5）设置流动相流速为1.0mL/min，进样量为30微升；（6）将芳香族氨基酸经色谱柱分离后，用二极管阵列检测器进行分析，选择Tyr、Phe和Trp的最佳紫外检测波长进行测定；（7）通过外标法进行定量，以标准品峰面积与浓度做标准曲线，待测样品进样后可得到样品峰面积，通过标准曲线可计算出样品浓度；并通过对比样品和标准品中三种芳香族氨基酸的全波段色谱扫描图谱的相似程度，鉴定色谱峰的纯度。