| 主权项 |
一种提高产率和纯度的提取纯化根系边缘细胞的方法，按如下步骤进行：（1）RBCs的培养采用悬空法培养RBCs：将铁丝圆环固定于400‑1000 毫升的烧杯中，底部盛有50‑200 ml无菌水，将穿孔滤纸置于铁丝圆环上；之后把露白种子播于穿孔滤纸上，封口后于23‑27℃培养箱中黑暗培养；为了使初生根保持湿润，每1‑2小时对根尖喷施pH 5.5‑6.2的磷酸缓冲液，当初生根的长度为0.5‑4厘米时，对RBCs进行提取和纯化；（2）RBCs的提取：取长度在0.5‑4厘米初生根的幼苗5‑15株，置入盛有100‑200微升pH 5.5‑6.2的磷酸缓冲液的离心管中，之后将离心管固定在0.5±0.2厘米厚度的泡沫板上，离心管底部透过泡沫板并暴露在空气中的长度至少0.5厘米；将泡沫板漂浮在盛有干净水的超声波清洗机中，室温条件下超声30‑60秒；取出离心管，拿出幼苗植株，离心管底部有白色的沉积物，就是提取到的RBCs；（3）RBCs的纯化：将提取到RBCs的离心管用pH 5.5‑6.2的磷酸缓冲液配平，普通离心机100‑400 <i>g</i>离心2‑5分钟，去除上清液；然后用相同的磷酸缓冲液500‑1000微升悬浮离心管底部的沉积物；然后将200‑500微升离心管中的悬浮液混合物转移到5‑10毫升的离心管中，再将质量比为30‑40%的蔗糖水溶液5‑9毫升用注射器缓慢注入到5‑10毫升的离心管底部，用pH 5.5‑6.2的磷酸缓冲液配平，室温下普通离心机100‑400 <i>g</i>离心2‑5分钟；取出离心管，离心管底部和中间均有沉积物，底部的沉积物是破碎的细胞壁，中间的沉积物为RBCs，将5‑10毫升的离心管中间的沉积物转移到100‑200微升的离心管中，pH 5.5‑6.2的磷酸缓冲液配平，普通离心机100‑400<i> g</i>离心2‑5分钟，去除上清液；然后用相同的磷酸缓冲液100‑200微升悬浮离心管底部的沉积物；该悬浮混合液即为纯化的RBCs的溶液。 |
