一种用于痕量汞离子检测的酶基电化学生物传感方法

摘要

本发明为一种用于痕量汞离子检测的酶基电化学生物传感方法，属于环境分析领域。本发明利用胸腺嘧啶与汞离子特异性作用和核苷酸外切酶Ⅲ循环放大功能实现对痕量汞离子检测。探针DNA与目标DNA通过捕获汞离子杂交形成特殊结构的双链DNA，结果pDNA被ExoⅢ消化，而tDNA游离出继续与其他的pDNA杂交并重复上述过程。消化后残留pDNA与[Ru(NH₃)₆]³⁺电信号强度成正比，故可实现对汞离子检测。本发明的酶基电化学生物传感方法具有灵敏度高、选择性高、成本低等特点，对汞离子检测线性范围为0.01-500nM，检测限为1pM。

主权项

一种用于痕量汞离子检测的酶基电化学生物传感方法，其特征在于，步骤如下：(1)将10‑20μL的含有1μM的探针DNA的孵化缓冲液滴加到清洁后的金电极表面，在4℃下孵化24小时，即得到pDNA修饰后的金电极；其中，pDNA的孵化缓冲液的成分为：0.1M NaCl、10μM三(2‑羧乙基)膦和pH＝7.4的10mM三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液；(2)将步骤(1)得到的pDNA/Au浸入到6‑巯基己‑1‑醇缓冲溶液中，保持1‑2小时，即得到处理后的pDNA/Au；其中，MCH缓冲溶液的成分为1‑5mM MCH和pH＝7.4的10mM Tris‑HCl；(3)将经过步骤(2)处理后的pDNA/Au用pH＝7.4的Tris‑HCl淋洗，再浸入含有浓度不大于10μM汞离子的核苷酸外切酶Ⅲ消化缓冲液中，在37‑40℃恒温水浴中反应10‑30分钟，即得到消化后的pDNA/Au电极；其中，Exo Ⅲ消化缓冲液的成分为pH＝8的50mM Tris‑HCl、5mM MgCl₂、1mM二硫苏糖醇、0.1‑1μM tDNA、1.8units/μL Exo III和0.2‑0.6M NaCl；(4)将步骤(3)得到的消化后的pDNA/Au电极浸入含有pH＝7.0的10mM Tris‑HCl和50μM氯化六氨合钌的电解质溶液中，利用方波伏安进行测试并分析结果；测试参数为：初始电压‑0.6V，终止电压0V，频率25Hz。