铁皮石斛干细胞及其分离培养方法

摘要

本发明公开了铁皮石斛干细胞及其分离培养方法，该方法包括以下步骤：培养含有静止中心的植物根部组织、静止中心干细胞的传代培养及放大培养，然后再根据需要制成干细胞干粉或提取液。本发明克服了铁皮石斛离体材料易褐化的问题，其干细胞系的细胞尚未分化，营养条件下细胞增量大，培养时间短，细胞活性强大。本发明具有技术工艺易操作、流程少、产出量大，所得铁皮石斛干细胞抗衰老、抗氧化、促头发生长及抗脱发活性强，可制成防治各种衰老及脱发的功能保健品、化妆品以及中药抗衰老、抗脱发等相关药品。

主权项

铁皮石斛干细胞的分离培养方法，其特征在于包括以下步骤：(1)培养含有静止中心的植物根部组织取铁皮石斛的根尖，切除根冠，从切口开始截取1mm长的根部组织作为外植体，放入诱导培养基中培养3‑6周；(2)静止中心干细胞的传代培养及放大培养将静止中心干细胞移入液态培养基中，在暗室中25±1℃下传代培养3‑5周，此为第一阶段；第二阶段是将干细胞放大培养1‑2周，然后加入蔗糖、甲基茉莉酮酸酯、N‑苯酰甘氨酸以及无菌磁化水的混合液，再继续培养1‑2周；第一阶段与第二阶段所用的液态培养基相同，都是N6培养基；步骤(1)的诱导培养基和步骤(2)的液态培养基中都含有1‑8mg/L的2,4‑D；(3)制备铁皮石斛干细胞制剂A、干细胞干粉将放大培养后得到的细胞系超滤，截留回收大分子团；往大分子团中注入乙醇溶液，超声粉碎后二次超滤；收集滤过液，再用无水乙醇冲洗超滤柱，回收全部无水乙醇与滤过液混合，真空浓缩、真空冷冻干燥、粉碎即得铁皮石斛干细胞干粉；B、干细胞提取液将放大培养后得到的细胞系过滤，截留回收粘胶状细胞系培养物，将其在‑30℃下预冻2.5小时，再放入液氮中速冻2.5小时，再于23±2℃下解冻1小时，重复该预冻、速冻、解冻的操作1次；将获得的细胞系黏液质粉碎，然后注入乙醇溶液真空浓缩，将浓缩物真空冷冻干燥、粉碎，溶于水后即得铁皮石斛干细胞提取液。