一种大量快速提取鲎素肽的方法

摘要

本发明涉及一种大量快速提取鲎素肽的方法，该方法步骤包括：⑴收集鲎血细胞备用，将鲎血细胞悬浮于Tris-HCl,NaCl缓冲液匀浆，离心弃上清液，沉淀用同一缓冲液洗两次；⑵沉淀以固液1：6.5～8的比例加入酸液匀浆，离心收集上清液，其沉淀用酸液重抽提三次，得酸抽提液；⑶将酸抽提液用NaOH调节pH至6.5，离心去除沉淀；再用0.1－0.22μm的膜进行过滤，得上清液；⑷将上清液沸水浴处理，离心弃沉淀收集上清液；再用0.1－0.22μm的膜进行过滤，得上清液；⑸截留分子量为10kD超滤膜处理；⑹截留分子量为3kD超滤膜处理；⑺脱盐处理；⑻冷冻干燥制备成干粉。本方法鲎素肽得率及纯度高，工艺简化，时间大幅缩短，大大降低成本，处理量大幅提升。

主权项

一种大量快速提取鲎素肽的方法，其特征在于：该方法的步骤如下：⑴原料处理:a，收集鲎血细胞备用；b，将鲎血细胞悬浮于Tris‑HCl,NaCl缓冲液匀浆；其中，Tris‑HCl为20mmol/L，NaCl为pH8.8含50mmol/L NaCl；c，然后8000r/min下离心30min，弃上清液，所收集的沉淀用同一缓冲液洗两次；⑵酸解：a，洗涤后的沉淀以固液比例1：6.5～8的比例加入酸液匀浆；所述酸液为20mmol/L HCl；b，匀浆液在8000r/min，离心30min，收集上清液；c，其沉淀用酸液重抽提，同样收集上清液，最后弃去沉淀，三次收集的上清液即为所需的鲎血细胞酸抽提液；⑶调pH值去沉淀：a，将鲎血细胞酸抽提液用NaOH调节pH至6.5，离心去除沉淀；b，再用0.1－0.22μm的膜进行过滤，得上清液；⑷热变性处理：a，将上步所得上清液沸水浴处理5～10min，8000r/min离心20min弃沉淀收集上清液；b，再用0.1－0.22μm的膜进行过滤，得上清液；⑸截留分子量为10kD超滤膜处理；⑹截留分子量为3kD超滤膜处理；⑺脱盐处理；⑻冷冻干燥制备成干粉低温保存。