一种分析蛋白O-糖基化位点的方法

摘要

本发明涉及一种分析蛋白O-糖基化位点的方法，步骤如下：(1)将蛋白质组样品或单个蛋白样品经内切酶酶切后，再经内切糖苷酶和外切糖苷酶酶切，制得带有GalNAc糖标签的肽段和非糖肽的组学蛋白样品或单个蛋白样品；(2)上样于榴莲凝集素色谱柱进行分离，制得组学蛋白样品；(3)将单个蛋白样品或组学蛋白样品使用C₁₈反相色谱柱分离，然后在正离子模式下用高分辨质谱仪进行检测，得到高分辨质谱图；(4)将得到的质谱数据进行处理，通过搜库结果获得蛋白糖基化位点信息。本发明建立了单个蛋白和组学蛋白样品中糖蛋白的O-糖基化位点的检测方法，能更快速、更准确、更全面的得到位点信息。

主权项

一种分析蛋白O‑糖基化位点的方法，其特征在于，步骤如下：(1)将蛋白质组样品或单个蛋白样品经内切酶酶切后，再经内切糖苷酶和外切糖苷酶组合切除N糖链与部分O‑糖链，经减压干燥，制得带有GalNAc糖标签的肽段和非糖肽的组学蛋白样品或单个蛋白样品；(2)将步骤(1)制得的带有GalNAc糖标签的肽段和非糖肽的组学蛋白样品上样于榴莲凝集素色谱柱进行分离，收集到酶切后带有GalNAc糖标签的肽段溶液，经减压干燥后，制得组学蛋白样品；(3)将步骤(1)制得的单个蛋白样品或步骤(2)制得的组学蛋白样品使用C₁₈反相色谱柱分离，然后在正离子模式下用高分辨质谱仪进行检测，得到高分辨质谱图；(4)将得到的质谱数据用Mascot Distiller软件进行处理，再用MASCOT在SwissProt数据库中进行搜索，参数设定如下：酶最大漏切位点：2；固定修饰：Carbamidomethylation，半胱氨酸；可变修饰：+HexNAc，203Da，丝氨酸和苏氨酸；+0.9840Da，天冬酰胺变成天冬氨酸；氧化，甲硫氨酸；乙酰化，N‑末端；环化，N‑末端；母离子质量误差为15ppm，二级碎片质量误差为0.8Da；通过搜库结果获得蛋白糖基化位点信息。