基因多态性区域测序文库及其制备方法

摘要

本发明涉及一种基因多态性区域测序文库及其制备方法，属于分子生物学领域。本发明的基因多态性区域测序文库的制备方法包括以下步骤:(1)根据基因多态性区域特征，设计引物，通过PCR扩增得到包含保守区域和多态性区域的DNA片段；(2)向PCR扩增所得DNA片段中加入核酸外切酶，控制核酸外切酶的浓度与反应时间或者控制核酸外切酶的反应温度与反应时间，水解DNA片段；(3)向步骤(2)所得DNA片段的水解产物中加入单链核酸酶，消化DNA突出单链，得到DNA混合片段。本发明制备基因多态性区域测序文库的方法特异性高、快速，可用于高度多态性区域的测序分型。

主权项

一种基因多态性区域测序文库的制备方法，其特征在于：所述基因多态性区域测序文库的制备方法包括以下步骤：(1)根据基因多态性区域特征，设计一对分别位于多态性区域上游以及下游保守位点的引物，通过PCR扩增得到包含基因保守区域和多态性区域的DNA片段；(2)向步骤(1)PCR扩增所得DNA片段中加入核酸外切酶，控制核酸外切酶的浓度与反应时间或者控制核酸外切酶的反应温度与反应时间，水解DNA片段；(3)向步骤(2)所得DNA片段的水解产物中加入单链核酸酶，孵育，消化DNA突出单链，得到DNA混合片段；其中，所述步骤(1)的引物中，至多一条引物带有保护DNA不被核酸酶水解的化学修饰。