基于STAT3和NF-κB双信号通路为靶点的抗肿瘤药物筛选细胞模型及其构建和应用

摘要

本发明提供了一种基于STAT3和NF-κB双信号通路为靶点的高通量抗肿瘤药物筛选细胞模型，该模型采用STAT3特异性结合序列与NF-κB特异性结合序列组合建立报告系统载体；结合同时具有组成型STAT3和NF-kB活性细胞构建而成，用于筛选治疗STAT3和/或NF-κB持续活化造成的细胞癌变，STAT3与NF-κB相互结合、相互促进引起的细胞癌变的药物，相对于单信号的药物筛选系统具更高的效率。由于选用同时具有组成型STAT3和NF-kB的活性细胞，模型细胞中报告基因处于高度活化状态，无需使用外加刺激物，简化了筛选流程，降低了筛选成本，提升了系统稳定性、高效性及易用性，更适用于高通量药物筛选。

主权项

基于STAT3和NF‑κB双信号通路为靶点的抗肿瘤药物筛选细胞模型，其特征在于：采用 STAT3 特异性结合序列与 NF‑κB 特异性结合序列组合，建立报告系统载体；将上述载体转染同时具有组成型 STAT3 和 NF‑κB 的活性细胞，构建成抗肿瘤药物筛选模型；所述STAT3的特异性结合序列为5’‑TTCCCGTAA‑3’和 5’‑TTCCTGTAA‑3’；所述NF‑κB 特异性结合序列为5’‑GGGAATTTCC‑3’；所述报告系统载体是在含有荧光素酶报告基因的报告载体多克隆位点中插入有序列为5’‑TTCCCGTAA‑3’和 5’‑TTCCTGTAA‑3’的STAT3 特异性结合序列与序列为5’‑GGGAATTTCC‑3’的 NF‑κB 特异性结合序列作为报告系统载体的响应序列，构建成的报告系统载体，该报告系统载体上完整插入序列如下：5’‑TTTCCCGTAAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAAGCTCGCTAGCATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAATTCCTGTAAGCTCGAGGGGAATTTCCAGATCTAGACACTAGAGGGTATATAATGGAAGCTCGACTTCCAGCTT‑3’,或，5’‑TTTCCCGTAAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAAGCTCGCTAGCATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAATTCCTGTAAGTTTCCCGTAAATTCCTGTAAGCTCGAGCGGAAATTCCCGTAAACGGAAATTCCCGTAAAAGATCTAGACACTAGAGGGTATATAATGGAAGCTCGACTTCCAGCTT‑3’；所述同时具有组成型 STAT3 和 NF‑κB 的活性细胞为DU145前列腺癌细胞、H1299人肺癌细胞、A549人肺癌细胞、HCT119人结肠癌细胞、Hela人宫颈癌细胞、MCF‑7人乳腺癌细胞、MDA‑MB‑468人乳腺癌细胞或 MDA‑MB‑231人乳腺癌细胞。