携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒及其构建方法和应用

摘要

一种携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒，缺失E1区和E3区，在缺失区插入了锌指核酸酶表达元件和供体DNA。构建方法由构建腺病毒骨架载体、构建携带锌指核酸酶表达元件的腺病毒E3区穿梭载体、构建携带供体DNA的腺病毒E1区穿梭载体、构建携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒载体、包装和扩增以及纯化步骤组成，携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒在制备治疗遗传性疾病药物中的用途。

主权项

一种携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒，其特征在于：缺失E1和E3区，在缺失区插入了锌指核酸酶表达元件和供体DNA；所述的锌指核酸酶表达元件是由Tet‑on诱导性启动子、锌指核酸酶基因以及转录终止信号组成；Tet‑on诱导性启动子由以下结构组成：7个重复的四环素反应元件，在该重复序列两端连接有启动子核心元件，包括左侧的miniCMV和右侧的tight miniCMV，在左侧miniCMV的下游连接有rtTA2S‑M2转录因子和SV40pA，在右侧tight miniCMV的下游插入一对锌指核酸酶基因，在锌指核酸酶基因的3＇端连接有转录终止信号； miniCMV的序列如下： GGTACCCGGGTCGAGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACCGGGACCGATCCAGCCTCCGCGGCCCCGAATTC tight miniCMV的序列如下： GGTCGACTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCGAATTCC。