一种细胞DNA中8-羟基脱氧鸟苷和脱氧鸟苷的检测方法

摘要

本发明属于细胞DNA检测技术，具体是一种细胞DNA中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）和脱氧鸟苷（dG）的检测方法，采用该方法可定量检测出由于卷烟烟气有害成分暴露导致的细胞DNA中8-OHdG和dG的含量变化，从而达到评估有害成分诱导产生的DNA氧化损伤的目的。本发明用脱氧核糖核酸酶Ⅰ、碱性磷酸酶水解细胞中的DNA，并在酶解液中加入甲磺酸去铁胺，避免dG在酶解过程中氧化，取酶解液采用HPLC-MS/MS进行检测，并根据8-OHdG/10⁶dG的值评估细胞DNA氧化损伤程度。该方法去除了高浓度金属离子及人为dG氧化的干扰，结果更加准确，且检出限低、灵敏度高、重复性和回收率好。

主权项

一种细胞DNA中8‑羟基脱氧鸟苷和脱氧鸟苷的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）DNA提取、水解：收集细胞，提取细胞DNA，并用核酸浓度测定仪测定DNA纯度和浓度，取6μgDNA加入甲磺酸去铁胺溶液中，用脱氧核糖核酸酶Ⅰ和碱性磷酸酶对DNA进行酶解；（2）样品纯化和HPLC‑MS/MS分析：取10µL酶解后的溶液，加入20ng D₁‑dG内标，超纯水稀释到1mL，经0.22μm滤膜过滤后，采用HPLC‑MS/MS检测脱氧鸟苷的浓度；同时，取150µL酶解溶液，加入1ng [C¹³N¹⁵]‑8‑OH‑G 内标，过C18柱进行纯化和浓缩后，采用HPLC‑MS/MS检测8‑羟基脱氧鸟苷的浓度。