一种生物催化法合成腺苷蛋氨酸的方法

摘要

本发明涉及一种生物催化法合成腺苷蛋氨酸的方法，属于生物制药技术领域。将大肠杆菌接种到种子培养基中，震荡培养过夜后，取过夜培养物加入LB液体培养基，将其震荡培养至对数中期后，在其菌液中加入IPTG定浓度，继续震荡完成培养并进行SAM合成酶表达后，离心处理得湿菌体，搅拌抽提处理后，通过离子交换树脂柱进行上样，并进行纳滤浓缩后，结晶、真空干燥得晶体。采用本发明技术方案，具有转化率高、周期短、纯度高等优点。

主权项

一种生物催化法合成腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）大肠杆菌培养及SAM合成酶表达：将大肠杆菌接种到种子培养基中，震荡培养过夜后，取过夜培养物加入LB液体培养基，将其震荡培养至对数中期后，在其菌液中加入IPTG定浓度，继续震荡完成培养并进行SAM合成酶表达，其中，种子培养基的作用成分为：细菌用胰蛋白胨12g，酵母提取物24g，甘油4 mL，KH₂PO₄、K₂HPO₄，先将细菌用蛋白胨、酵母提取物和甘油溶解于900 mL水中形成水溶液，再向每100 mL该水溶液中加入2.31g KH₂PO₄、16.43g K₂HPO₄；LB液体培养基的作用成分为：50mg/ml羟苄青霉素和34mg/ml的氯霉素，（2）离心萃取：将步骤（1）培养的大肠杆菌菌液离心处理得湿菌体，在该湿菌体中滴加乙酸乙酯水溶液，搅拌抽提处理后，加入H₂SO₄溶液酸化处理后，离心去除细胞碎片，得SAM萃取液；（3）上样、洗脱：调整SAM萃取液的pH值后，通过离子交换树脂柱进行上样，上样结束后用去离子水冲洗离子交换树脂柱，再进行洗脱得SAM洗脱液；（4）纳滤、浓缩：将SAM洗脱液进行纳滤浓缩，得浓缩液；（5）结晶、真空干燥：搅拌状态下，将浓缩液滴入无水乙醇中，继续搅拌后，静置、沉降，过滤得晶体，将该晶体进行洗涤后真空干燥得产品。